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汉黄芩素提高人CD3 AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨
目的：观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响，并探讨其发生的机制。方法：分离健康者外周血PBMC；在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h：CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率；MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响；流式细胞术（FCM）检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素（PFP）、颗粒酶B（GrB）、CD107a的表达；乳酸脱氢酶（LDH）释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性；Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶（ ERK1／2）蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果：汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖，汉黄芩素浓度为3.2 mg／L时，细胞增殖率比对照组（0 mg／L）高23％，两者比较有统计学差异（ P＜0.05）。在汉黄芩素为3.2 mg／L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性高（60.4％），与对照组（42.7％）比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、GrB、CD107a表达显著高于对照组（P＜0.05）。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1／2蛋白表达较对照组均有所上调，浓度在12.5～0.8 mg／L时，ERK1／2蛋白表达高于对照组（ P＜0.05）。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2 mg／L汉黄芩诱导48 h 后，肝癌细胞SMMC-7721通过transwell 小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg／L时低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg／L时低，与对照组比较有统计学意义（ P＜0.05）。结论：汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖，增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性，抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1／2蛋白，上调CD3AK细胞表面PFP、GrB、CD107a的表达有关。
关键词： 汉黄芩素 肝癌/SMMC-7721 CD3AK细胞
