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miR-34b抑制非小细胞肺癌A549的侵袭和迁移
目的:本研究旨在探索miR-34b对非小细胞肺癌A549侵袭和迁移的影响及HIF1α在其中所起的作用.方法:A549细胞转染miR-34b mimic和pc-HIF1α过表达载体以过表达miR-34b和缺氧诱导因子-1α (HIF1α).A549细胞分为4组:A549(空对照)组,miR-34b mimic组,pc-HIF1α组和miR-34b mimic+pc-HIF1α组.实时定量PCR (qRT-PCR)检测miR-34b表达和HIF1α的mRNA水平.荧光素酶分析验证miR-34b和HIF1α的靶向关系.蛋白印迹检测HIF1α、基质金属蛋白酶2(MMP-2),Snail和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白水平.Transwell分析细胞侵袭.划痕实验检测细胞迁移.结果:转染miR-34b mimic可提高A549细胞miR-34b的表达水平,降低HIF1α的mRNA水平(P＜0.001).miR-34b可直接靶向HIF1α.miR-34b过表达可抑制pc-HIF1α诱导的HIF1α蛋白水平升高(P＜0.01).与对照组相比,miR-34b过表达可显著降低细胞侵袭数目和愈合率(P＜0.01).此外,miR-34b过表达可显著抑制HIF1α过表达导致的细胞侵袭和愈合率增加(P＜0.01).miR-34b mimic组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平低于对照组(P＜0.01).pc-HIF1α组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平高于对照组(P＜0.01).与pc-HIF1α组相比,miR-34b mimic+pc-HIF1 α组MMP-2、Snail和VEGF相对蛋白水平下降(P＜0.01).结论:miR-34b-5p过表达通过靶向HIF1α抑制非小细胞肺癌A549的侵袭和迁移.
关键词： 肺癌 miR-34b-5p 侵袭 迁移 HIF1α -
miR-34b-5p在骨髓来源巨噬细胞极化中作用的研究
目的 研究miR-34b-5p在骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophages,BMDM)极化中的作用.方法 分离小鼠的骨髓细胞,在体外用巨噬细胞集落刺激因子诱导其分化为BMDM,进行PBS(对照)、M1[脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、干扰素(interferon,IFN)-γ]或M2[白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)]极化处理24 h,实时定量PCR检测BMDM的miR-34b-5p表达;BMDM分别转染miR-34b-5p模拟物、阴性对照模拟物、miR-34b-5p抑制物以及阴性对照抑制物,培养24 h后再进行对照、M1或M2极化处理24 h,实时定量PCR、流式细胞术和酶联免疫吸附试验检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-6的表达变化.结果 与对照组相比,M1极化的BMDMmiR-34b-5p表达水平升高(P＜0.05),M2极化的BMDMmiR-34b-5p表达水平无明显变化(P＞0.05);mRNA相对定量结果显示,在对照、M1和M2极化的BMDM中,与对照模拟物组相比,过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达升高(均P＜0.05),与对照抑制物组相比,miR-34b-5p表达抑制组的iNOS、TNF-α和IL-6表达下降(均P＜0.05);蛋白定量结果显示,与对照模拟物组相比,在PBS对照和M2极化的BMDM中,过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达没有变化(均P＞0.05),PBS在M1极化的BMDM中,过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达升高(均P＜0.05).结论 M1极化的BMDM高表达miR-34b-5p,且miR-34b-5p促进BMDM的M1型极化.
