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氟对人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞活性氧水平及线粒体融合的影响
目的 分析研究氟对人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞活性氧水平及线粒体融合的影响.方法 将0.4mmol/L及4.0 mmol/L的氟化钠注人人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞中,对照组中仅注入双蒸水,作用时间为0.25d、0.Sd、1.0d、2.0d,通过细胞内氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒和活体细胞线粒体形态荧光染色试剂盒Mito Tracher RED对氧自由基和线粒体进行染色处理,对比经不同浓度氟化钠处理的人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞中活性氧水平及Ⅱ型线粒体形态与对照组的差异和尿氟含量变化情况.结果 染氟人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞中活性氧荧光出现染色异常,并且随染氟时间的增加,氟离子浓度越高,活性氧水平上升幅度越大,人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞活性氧水平和染氟时间及氟离子浓度呈正相关关系,三组活性氧水平对比差异均有统计学意义(P＜0.05);对照组人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞中线粒体融合分裂功能基本正常;经不同浓度氟化钠处理的人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞线粒体均分裂亢进,并且随着处理时间的增加及氟离子浓度的增加,人脑神经母细胞瘤细胞株体外培养细胞线粒体分裂程度不断增强;随着处理时间的增加及氟离子浓度的增加,尿氟含量呈持续上升趋势,三组尿氟含量对比差异有统计学意义(P＜0.05),4.0 mmol/L氟化钠组尿氟含量与0.4 mmol/L氟化钠组对比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 摄取氟量过高时,会导致人脑神经母细胞瘤细胞株细胞氧自由基水平异常增高,使其线粒体呈分裂状,并且随剂量和时间的增加而加重.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 体外培养细胞 活性氧水平 线粒体融合 -
沉默线粒体分裂蛋白1基因对氟致人脑神经母细胞瘤细胞株线粒体融合蛋白和膜电位损伤的影响
目的 研究沉默线粒体分裂蛋白1 (Fis1)对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)Fis1、线粒体融合蛋白1 (Mfn1)及线粒体膜电位水平的影响,并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验,采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组[2 mmol/L氟化钠(NaF)]、染氟阴性对照组[2 mmol/L NaF+非特异性小干扰RNA(siRNA)]、沉默组(2 mmol/L NaF+ siRNA-Fis1).蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平.结果 与空白对照组(1.37±0.18、1.00±0.04,1.57±0.19、1.00±0.04,1.00±0.10)比较,染氟组Fis1蛋白(1.72±0.04)及mRNA表达水平(1.48±0.13)均升高,Mfn1蛋白(0.87±0.02)及mRNA表达水平(0.69±0.07)均降低,线粒体膜电位水平(0.76±0.13)降低(P均＜0.05).与空白对照组比较,沉默组Fis1蛋白(0.79±0.07)及mRNA表达水平(0.06±0.03)均降低,Mfn1蛋白(1.71±0.04)及mRNA表达水平(1.52±0.05)均升高(P均＜0.05),线粒体膜电位水平(0.94±0.01)有降低趋势.与染氟组比较,沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低,Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高,线粒体膜电位水平升高(P均＜0.05).结论 人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
染氟对人脑神经母细胞瘤细胞线粒体融合蛋白1和分裂蛋白1表达与膜电位的影响
目的 评估氟对体外培养的人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)线粒体膜电位和线粒体融合蛋白1(Mfn1)、分裂蛋白1(Fis1)表达的影响.方法 在SH-SY5Y细胞中加入0.0(对照)、0.4、2.0、4.0mmol/L氟化钠(NaF),培养6、12、24、48 h;利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位进行染色;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测线粒体Mfn1和Fis1蛋白的表达.结果 NaF作用6、12、48 h时,与对照组(1.63±0.18、1.13±0.15、1.30±0.02)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的红绿荧光比值(1.01±0.10、0.80±0.04,0.75±0.13、0.62±0.10,0.82±0.01、0.56±0.04)明显降低(P均＜ 0.05);NaF作用6、12、48 h时,与对照组(0.93±0.03、1.05±0.07、1.17±0.04)比较,0.4、2.0、4.0mmol/L NaF处理组Mfn1蛋白的表达(0.75±0.02、0.65±0.05、0.57±0.06,0.83±0.06、0.79±0.06、0.69±0.06,0.98±0.05、0.73±0.07、0.62±0.09)明显降低(P均＜0.05);NaF作用12 h时,与对照组(0.90±0.05)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组Fis1蛋白表达(1.14±0.06,1.23±0.06)明显升高(P均＜0.05).结论 氟中毒损伤可引起神经细胞线粒体融合分裂水平改变并致线粒体膜电位下降,其改变可能与高氧化应激发病学说相关.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1
