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“益肾调督”针灸法对阿尔茨海默病大鼠海马神经元线粒体动力学相关蛋白的影响
目的:观察“益肾调督”针灸法对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元线粒体动力学相关蛋白,即线粒体分裂蛋白1(Fis 1)和线粒体融合蛋白1(OPA 1)的影响,探讨其在保护线粒体过程中的可能有效机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和针灸治疗组,每组20只.运用海马注射Aβ1-42的方法复制模型.针灸治疗组采用针刺加灸“百会”和“肾俞”穴的方法治疗,每日1次,每次15 min,7d为1个疗程,共计2个疗程,疗程间休息1d.运用蛋白印迹技术和免疫荧光技术检测海马Fis 1和OPA 1的水平.结果:模型组海马神经元OPA 1的水平明显低于正常组和假手术组(P＜0.01),Fis 1水平明显高于正常组和假手术组(P＜0.01);而“益肾调督”针灸法能够有效上调OPA 1的水平,下调Fis 1的水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:“益肾调督”针灸法可能通过调节线粒体分裂与融合蛋白的失衡,改善线粒体动力学异常,从而达到改善线粒体损伤,保护线粒体功能的目的.
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针刺对阿尔茨海默病模型小鼠行为学及线粒体分裂蛋白1、融合蛋白1表达和超微结构的影响
目的 观察针刺对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠行为学,大脑海马神经元线粒体分裂蛋白1(Fis1)、线粒体融合蛋白1(OPA1)表达及线粒体超微结构的影响,探讨针刺治疗AD的作用机制.方法 40只雄性SAMP8小鼠随机分为针刺组和模型组,每组20只.另取20只同月龄雄性正常老化模型小鼠(SAMR1小鼠)作为正常组,针刺组选取"肾俞""百会""血海""膈俞"进行干预.8周后,Morris水迷宫实验检测小鼠行为学,之后提取海马组织,Western blot检测小鼠海马线粒体相关蛋白Fis1和OPA1的表达,电镜观察小鼠海马神经元线粒体超微结构.结果 与模型组比较,针刺组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),其停留在原平台象限时间延长和穿越原平台次数明显增加(P<0.05);针刺组Fis1表达明显减弱,OPA1表达明显增强(P<0.05,P<0.01);针刺组线粒体超微结构明显改善,线粒体体密度及面密度明显增加(P<0.05).结论 针刺可能通过提高模型小鼠学习记忆能力、下调Fis1表达、上调OPA1表达和改善线粒体超微结构,达到治疗AD的作用.
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脾气虚模型大鼠海马与下丘脑神经元线粒体分裂因子和线粒体分裂蛋白1的表达
目的 观察脾气虚模型大鼠海马、下丘脑神经元线粒体形态学变化及其分裂情况,探讨脾气虚的发生机制.方法 20只SPF级雄性SD大鼠随机分为非脾气虚组和脾气虚模型组,每组10只.脾气虚模型组采用饮食失节+劳倦方法制脾气虚模型.透射电镜观察海马CA1区及下丘脑神经元线粒体的形态学变化;ELISA法检测海马和下丘脑组织ATP含量;Western blot法检测上述组织线粒体分裂因子(MFF)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达.结果 非脾气虚组线粒体较丰富,形态基本正常,而脾气虚模型组线粒体数量减少,其中海马CA1区神经元线粒体出现肿胀、嵴减少,甚至空泡化,而下丘脑还存在较多线粒体自噬现象.与非脾气虚组比较,脾气虚模型组体重、进食量、饮水量、运动距离、站立次数以及前肢抓力均下降,海马和下丘脑神经元ATP含量降低,MFF及Fis1蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 海马和下丘脑相关神经元线粒体功能低下及其促分裂成分表达增加与脾气虚的发生密切相关.
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脾气虚模型大鼠海马与下丘脑神经元线粒体分裂因子和线粒体分裂蛋白1的表达
目的 观察脾气虚模型大鼠海马、下丘脑神经元线粒体形态学变化及其分裂情况,探讨脾气虚的发生机制.方法 20只SPF级雄性SD大鼠随机分为非脾气虚组和脾气虚模型组,每组10只.脾气虚模型组采用饮食失节+劳倦方法 制脾气虚模型.透射电镜观察海马CA1区及下丘脑神经元线粒体的形态学变化;ELISA法检测海马和下丘脑组织ATP含量;Western blot法检测上述组织线粒体分裂因子(MFF)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达.结果 非脾气虚组线粒体较丰富,形态基本正常,而脾气虚模型组线粒体数量减少,其中海马CA1区神经元线粒体出现肿胀、嵴减少,甚至空泡化,而下丘脑还存在较多线粒体自噬现象.与非脾气虚组比较,脾气虚模型组体重、进食量、饮水量、运动距离、站立次数以及前肢抓力均下降,海马和下丘脑神经元ATP含量降低,MFF及Fis1蛋白表达升高(P ＜0. 05,P ＜0. 01).结论 海马和下丘脑相关神经元线粒体功能低下及其促分裂成分表达增加与脾气虚的发生密切相关.
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沉默线粒体分裂蛋白1基因对氟致人脑神经母细胞瘤细胞株线粒体融合蛋白和膜电位损伤的影响
目的 研究沉默线粒体分裂蛋白1 (Fis1)对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)Fis1、线粒体融合蛋白1 (Mfn1)及线粒体膜电位水平的影响,并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验,采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组[2 mmol/L氟化钠(NaF)]、染氟阴性对照组[2 mmol/L NaF+非特异性小干扰RNA(siRNA)]、沉默组(2 mmol/L NaF+ siRNA-Fis1).蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平.结果 与空白对照组(1.37±0.18、1.00±0.04,1.57±0.19、1.00±0.04,1.00±0.10)比较,染氟组Fis1蛋白(1.72±0.04)及mRNA表达水平(1.48±0.13)均升高,Mfn1蛋白(0.87±0.02)及mRNA表达水平(0.69±0.07)均降低,线粒体膜电位水平(0.76±0.13)降低(P均＜0.05).与空白对照组比较,沉默组Fis1蛋白(0.79±0.07)及mRNA表达水平(0.06±0.03)均降低,Mfn1蛋白(1.71±0.04)及mRNA表达水平(1.52±0.05)均升高(P均＜0.05),线粒体膜电位水平(0.94±0.01)有降低趋势.与染氟组比较,沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低,Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高,线粒体膜电位水平升高(P均＜0.05).结论 人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
染氟对人脑神经母细胞瘤细胞线粒体融合蛋白1和分裂蛋白1表达与膜电位的影响
目的 评估氟对体外培养的人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)线粒体膜电位和线粒体融合蛋白1(Mfn1)、分裂蛋白1(Fis1)表达的影响.方法 在SH-SY5Y细胞中加入0.0(对照)、0.4、2.0、4.0mmol/L氟化钠(NaF),培养6、12、24、48 h;利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位进行染色;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测线粒体Mfn1和Fis1蛋白的表达.结果 NaF作用6、12、48 h时,与对照组(1.63±0.18、1.13±0.15、1.30±0.02)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的红绿荧光比值(1.01±0.10、0.80±0.04,0.75±0.13、0.62±0.10,0.82±0.01、0.56±0.04)明显降低(P均＜ 0.05);NaF作用6、12、48 h时,与对照组(0.93±0.03、1.05±0.07、1.17±0.04)比较,0.4、2.0、4.0mmol/L NaF处理组Mfn1蛋白的表达(0.75±0.02、0.65±0.05、0.57±0.06,0.83±0.06、0.79±0.06、0.69±0.06,0.98±0.05、0.73±0.07、0.62±0.09)明显降低(P均＜0.05);NaF作用12 h时,与对照组(0.90±0.05)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组Fis1蛋白表达(1.14±0.06,1.23±0.06)明显升高(P均＜0.05).结论 氟中毒损伤可引起神经细胞线粒体融合分裂水平改变并致线粒体膜电位下降,其改变可能与高氧化应激发病学说相关.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
MicroRNA-484通过靶向肝星状细胞中Fis1调控肝纤维化进程
目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P＜0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P＜0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)％ vs (57.54±6.76)％,P＜0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P＜0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.
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线粒体分裂相关蛋白高表达参与阿霉素大鼠肾病模型蛋白尿的发生
目的:探讨肾小球线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、P-Drp1 (Ser616)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)表达与足细胞损伤及蛋白尿发生的关系. 方法:建立阿霉素大鼠肾病模型,用免疫组化和western blot检测肾小球和肾皮质Drp1 、P-Drp1 (Ser616)及Fis1的表达,分析上述蛋白表达与蛋白尿及足细胞线粒体形态的相关性.在小鼠足细胞系MPC5过表达Drp1,分析对凋亡和线粒体形态的影响. 结果:肾小球和肾皮质Drp1在阿霉素大鼠肾病模型4周和6周时表达增强,肾小球P-Drp1(Ser616)在6周时表达增强,肾小球Fis1在2周和6周时增强.肾小球和肾皮质Drp1、肾小球P-Drp1 (Ser616)和Fis1表达与24h尿蛋白正相关.肾小球Drp1表达量与足细胞线粒体胞浆密度和线粒体细胞密度呈负相关.肾小球P-Drp1 (Ser616)与足细胞线粒体大长宽比呈负相关.肾小球Fis1与足细胞线粒体面积和周长呈负相关.过表达Drp1致小鼠足细胞凋亡显著增多,线粒体片段化. 结论:肾小球Drp1、P-Drp1(Ser616)与Fis1高表达参与阿霉素大鼠肾病模型蛋白尿的发生,Drp1高表达致线粒体片段化和足细胞凋亡.
关键词： 蛋白尿 足细胞 线粒体分裂 线粒体动力相关蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1及细胞色素C表达的影响
目的:观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1及细胞色素C表达的影响.方法:将45只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组各15只,模型对照组以及补阳还五汤组给予Bannister's颈动脉引流法以建立大鼠缺血再灌注脑损伤的动物模型,补阳还五汤组于造模造模后腹腔给药补阳还五汤0.4ml/(kg·d)1次,共用药7d,其余两组给予使用方式、剂量及使用频率和补阳还五汤组相同至实验结束.比较各组大鼠情况、神经功能缺损评分、海马神经细胞凋亡率、Drp1,Fis1和cyt-c的表达水平、Ca2+荧光强度、钙调神经磷酸酶活性比较.结果:治疗后,与正常对照组相比,模型对照组及补阳还五汤组Drp1、Fis1及cyt-c表达水平较高(P<0.05),神经功能评分较高(P<0.05),海马神经元细胞凋亡率较高(P<0.05), Ca2+浓度及钙调神经磷酸酶活性较高(P<0.05);与模型对照组相比,补阳还五汤组Drp1、Fis1及cy t-c表达水平较低(P<0.05),神经功能评分较低(P<0.05),海马神经细胞凋亡率较低(P<0. 05),Ca2+浓度及钙调神经磷酸酶活性较低(P<0.05).结论:补阳还五汤可在一定程度上下调缺血再灌注脑损伤大鼠Drp1、Fis1、cyt-c的表达水平以及海马神经细胞凋亡率,抑制线粒体分裂减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤,缓解脑缺血进一步损伤,有望为临床治疗方面提供新的干预方法.
