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α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响
目的 探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用.方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平；并用Aβ1 ～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果 转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7％和76.9％；细胞脂质过氧化水平升高38.4％；SOD和GSH-PX活性分别降低30.3％和21.1％.用Aβ1 ～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用.结论 α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用.
关键词： RNA干扰 α7尼古丁乙酰胆碱受体 氧化应激 SH-SY5Y细胞 -
SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响
目的 采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低；PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化.结论 α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系.
关键词： α7尼古丁乙酰胆碱受体 γ-分泌酶 早老蛋白 单过性跨膜蛋白 -
α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞α-分泌酶水平的影响
目的 采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Neuronal nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)基因表达,了解对APP代谢中的关键酶α-分泌酶水平的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用Real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7 nAChR、α-分泌酶(ADAM10)在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低；ADAM10mRNA及蛋白表达水平分别减少了73％和66％.结论 α7 nAChR基因表达抑制后α-分泌酶水平明显降低,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系.
关键词： α7尼古丁乙酰胆碱受体 α-分泌酶 阿尔茨海默病 -
α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞胆碱酯酶及胆碱乙酰化酶水平的影响
目的 采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对细胞胆碱酯酶(AChE)及胆碱乙酰化酶(ChAT)水平的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(siRNA),用real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7nAChR、AChE及ChAT在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 转染 α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低；α7 nAChR基因表达抑制能明显升高AChE及ChAT mRNA和蛋白表达水平,尤其是AChE的表达水平.结论 α7 nAChR基因表达抑制可能通过增加细胞AChE水平而增加神经递质乙酰胆碱的分解,而ChAT的表达升高可能为一种代偿机制,这可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系.
关键词： α7尼古丁乙酰胆碱受体 胆碱酯酶 胆碱乙酰化酶 RNA干扰 -
慢性摄入尼古丁加重大鼠脑缺血再灌注损伤性脑水肿的初步研究
目的 观察尼古丁慢性摄入加重大鼠脑缺血再灌注损伤性脑水肿的程度,并初步探讨其作用机制.方法 10周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠90只,按数字表法随机分为对照组(45只)和尼古丁组(45只),分别给予生理盐水[0.5 ml/(kg·d)]、尼古丁[3 mg/(kg·d)]皮下注射,1次/d.6周后将2组大鼠制作成大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,分5个时间点(每组每个时间点9只)观察脑水肿的发生情况和程度.取对照组和尼古丁组脑微血管内皮细胞株bEnd.3进行培养,分为3组:对照组、尼古丁组(1μmol/L)、尼古丁+α-金环蛇毒素组(尼古丁1 μmol/L,α-金环蛇毒素0.1μmol/L),检测3组细胞通透性的变化及细胞中水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)的表达变化.结果 与对照组比较,尼古丁组再灌注3.0h后脑水肿的程度明显加重,再灌注12.0 h时脑组织含水量大[2组分别为(86.53±2.26)％和(90.47±1.94)％],差异有统计学意义(P＜0.01).对脑微血管内皮细胞株bEnd.3的检测发现,尼古丁组细胞通透性[(143±11)％]明显高于对照组[(100±13)％],差异有统计学意义(P＜0.01);尼古丁+α-金环蛇毒素组通透性[(114±15)％]较尼古丁组明显改善,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞内AQP1蛋白的表达,尼古丁组(1.49±0.19)明显高于对照组(1.04±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01);尼古丁+α-金环蛇毒素组通透性(1.20 ±0.14)较尼古丁组有所减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在尼古丁刺激下,脑微血管内皮细胞通透性的增加是脑水肿加重的原因.内皮细胞中α7尼古丁乙酰胆碱受体(α7nAchR)和AQP1蛋白参与了其中的发生过程.
关键词： 尼古丁 内皮细胞通透性 水通道蛋白1 α7尼古丁乙酰胆碱受体 α-金环蛇毒素
