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原癌基因c－jun在毒胡萝卜素内酯诱导小鼠胚胎成纤维细胞凋亡中的作用
目的：探讨原癌基因 c－jun 在毒胡萝卜素内酯（TG）诱导的小鼠胚胎成纤维细胞凋亡中的作用及机制。方法应用 TG 处理野生型（c－jun＋／＋），基因敲除型（c－jun－／－）和基因重组型（c－jun Re）小鼠胚胎成纤维细胞后观察细胞生存率；流式细胞术（FACS）和 DNA 染色进行细胞凋亡分析；蛋白免疫印迹技术分析蛋白 c－jun、caspase－12及内质网应激反应分子伴侣 Grp78、 Gadd153和α－tubulin 的表达；共聚焦显微镜观察内质网染色及形态。结果不同浓度 TG 处理3组细胞4 h 后观察细胞生存率，TG 在50 nmol ／L 及100 nmol ／L 时3组细胞生存率出现差异，c－jun ＋／＋与c－jun－／－组较 c－jun Re 组生存率减低（P＜0．05）；TG 未处理与处理均未影响 c－jun 蛋白的表达，c－jun－／－无 c－jun 蛋白表达，c－jun Re 高表达 c－jun 蛋白；FACS 与 DNA 染色结果显示，TG 处理后 c－jun－／－组较 c－jun Re 组 DNA 含量增高（P＜0．05），并在 c－jun－／－组出现典型的凋亡细胞亚二倍体 DNA；荧光显微镜下观察细胞 DAPI 染色，与 c－jun Re 组比较 c－jun－／－组 DNA 染色弱且模糊紊乱；在 c－jun＋／＋与 c－jun－／－组中12 h 比24 h caspase－12蛋白表达低（P＜0．05），与 c－jun＋／＋组比较，c－jun－／－组 caspase－12蛋白表达明显增高（P＜0．05），而在 c－jun Re 组几乎无 caspase－12蛋白表达；经 TG 处理后，内质网应激反应分子伴侣 Grp78和 Gadd153，c－jun Re 组此两种标识物的表达明显低于其在 c－jun－／－组中的表达，并发现了内质网构造在两种细胞中的不同样式，c－jun Re 组相比 c－jun－／－组内质网结构更加完整丰富宽广。结论 TG 可以引起小鼠成纤维细胞出现细胞凋亡。 c－jun 基因表达的不同改变了细胞凋亡的程度，这种改变是通过细胞对内质网应激反应的介导。 c－jun 基因的表达在 TG 诱导的小鼠成纤维细胞凋亡中起保护作用。
