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侵袭性曲霉菌感染的诊断方法及临床应用
近年来由于肿瘤化疗，造血干细胞移植术、实体器官移植术后应用免疫抑制剂及糖皮质激素等药物〔1〕，临床上出现越来越多的免疫力低下的老年病人并使得侵袭性曲霉菌感染的发病率呈上升趋势，免疫力低下的老年病人发生侵袭性曲霉菌感染后的死亡率也一直居高不下。在侵袭性真菌感染中，曲霉菌所导致的感染占了很大的比例，2000～2008年美国一肿瘤中心发生侵袭性曲霉菌感染的比例达58％〔2，3〕。抽样调查显示，空气中存在的孢子0．1％～22％为曲霉属孢子〔4〕。曲霉菌感染可以导致人类多种疾病，比如侵袭性曲霉病，侵袭性肺曲霉病，过敏性支气管曲霉病，过敏性真菌鼻窦炎等。除了曲霉病以外，曲霉菌还可以导致其他多种疾病，比如曲霉肿、鼻窦炎、过敏性支气管曲霉病等〔5〕。研究表明，某些曲霉病也可发生于一些与上述高危因素侵袭性曲霉菌感染的诊断方法及临床应用无关的病人中，如肺曲霉病可继发于慢性阻塞性肺病（ COPD）、非真菌性肺炎等〔6〕。早期精确的诊断结果是及早开展抗霉菌治疗的前提。而及时、正确的抗霉菌治疗无疑能够显著改善临床预后，降低死亡率。
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纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增产物诊断侵袭性曲霉病
目的 建立纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)产物,用于快速诊断侵袭性曲霉病(LA).方法 采用NASBA扩增曲霉菌属特异性18S rRNA保守序列,扩增产物与5'端经巯基化修饰的特异性纳米金探针进行液相杂交,用该法检测106例临床血液标本(14例确诊,32例拟诊,60例未感染IA),并与GM试验结果进行比较以评价该方法的准确性.结果 纳米金探针只与曲霉菌属菌株的NASBA产物出现阳性杂交反应,而其他非曲霉菌均为阴性.NASBA-纳米金液相杂交法检测106例临床标本的敏感性和特异性分别为82.61％ (38/46)、81.67％(49/60),ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890.GM试验检测的敏感性和特异性分别为56.52％ (26/46)和83.33％ (50/60),AUCROC为0.723.结论 NASBA-纳米金液相杂交技术检测曲霉菌感染具有敏感性高、特异性强、操作简单的特点,适合实验室常规开展.
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核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果
目的 建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法.方法 以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉菌的孢子配制菌液,提取RNA后,采用核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)联合分子信标(molecular beacon,MB)技术进行荧光检测,并对该方法进行灵敏度和特异性分析.结果 扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与标本中霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y＝-10.7x +81.6,r=0.988).将含有梯度数量霉菌孢子的标本提取总RNA后进行检测,可建立相应标准曲线.该方法的灵敏度可达到1个孢子；对照菌株(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌)与曲霉菌提取总RNA经扩增后的产物进行电泳分析,发现仅曲霉菌出现特异性条带.结论 NASBA结合分子信标检测曲霉菌具有灵敏度高、特异性强的特点,具有潜在利用价值,有望成为曲霉菌感染的临床诊断方法.
