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Rho信号通路抑制中枢神经轴突再生的研究进展
外伤、疾病等导致的中枢神经的损伤在过去被认为是不可逆过程,近年来的研究发现,损伤后的神经组织可以通过多种方式得到修复,诸如残存神经元功能的代偿、备用通路的释放、损伤后神经纤维再生、突触重建、环路修复和干细胞移植等.Rho信号通路是生物体内重要的信号转导系统,广泛的参与细胞生长、分化、迁移和细胞发育等生命体活动.本文就抑制神经轴突再生相关的Rho信号途径加以综述.
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TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的机制
目的:牙周病是由多种因素引起的,特别是人牙周膜细胞的缺失.转化生长因子-β1 (TGF-β1)是一种多功能细胞因子,在治疗牙周病中发挥重要的作用,但很少有人清楚地研究TGF-β1对人牙周膜细胞的影响.因此,本研究的目的是探讨TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的信号通路.方法:人牙周膜细胞取自健康的前磨牙,并向同步化处理的细胞中加入10ng/ml的TGF-β1,并通过相差显微镜观察它们的形态学变化.通过免疫组化和共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白重排.用Western blot分析蛋白表达情况.结果:我们发现TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,激活ROCK蛋白的表达,并增加p-lIMK和p-cofilin的蛋白表达.ROCK抑制剂Y-27632使ROCK,p-lIMK和p-cofilin的蛋白表达下降.结论:TGF-β1可以诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,并且是通过上凋ROCK,p-lIMK和p-cofilin的活性完成的.本研究可以增强对TGF-β1在治疗牙周疾病方面的作用机制的了解.
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Rho/ROCK信号通路参与晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞骨架结构改变
本文旨在探讨Rho信号转导通路在晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HMVECs)形态及功能改变中的作用及机制.体外培养HMVECs细胞株,分别以不同浓度的AGEs修饰的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)处理不同时间,并设立对照组进行比较.用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构及分布:用Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制剂Y-27632或H-1152预处理细胞30 min后,与前者进行对比,同时用免疫印迹法检测Rho、ROCK及其磷酸化水平的变化;用FITC荧光标记蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数(apparent permeability coefficient,PA)值.结果显示,AGEs-HSA以剂量和时间依赖的方式引起HMVECs细胞骨架蛋白F-actin结构和分布的改变,未经修饰的HSA无此作用;ROCK特异性抑制剂Y-27632和H-1152均可抑制AGEs对细胞骨架的影响.AGEs-HSA引起Rho、ROCK磷酸化水平的增加(P<0.05),但对总蛋白没有明显影响.与对照组相比,AGEs-HSA使内皮细胞的通透性升高(P<0.01),Y-27632和H-1152均能抑制这种改变(P<0.01).以上结果提示,Rho信号通路在AGEs介导的HMVECs形态和功能改变中发挥了重要作用.
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RhoGDIs在调节Rho GTP酶中的作用
Rho特异鸟苷酸解离抑制因子(Rho-specific guanine nucleotide dissociation inhibitors,RhoGDIs)可以和Rho GTP酶结合形成复合物,来调节Rho GTP酶的活化状态,从而影响细胞的黏附、迁移、增殖等过程.RhoGDIs并不是简单的抑制Rho GTP酶,而是动态地调节Rho GTP酶的稳定、活化和循环.在本综述里,笔者将主要介绍RhoGDIs调节Rho GTP酶的活性、质膜穿梭以及竞争性作用的新研究进展.
关键词： Rho GTP酶 Rho特异鸟苷酸解离抑制因子 Rho信号通路 负调控 -
Rho-ROCK抑制在脊髓损伤修复中的作用
Rho信号通路在脊髓损伤的病理生理学中发挥重要作用。脊髓损伤会引发Rho信号通路上调，Rho及其下游激酶的活化触发了生长锥塌陷并显著抑制轴突再生。有研究表明Rho-ROCK信号通路能介导硫酸软骨素蛋白多糖对神经元的抑制作用，而抑制Rho信号通路能减弱这种抑制作用，因此抑制Rho信号通路能促进脊髓损伤后的神经保护及轴突再生。目前已鉴定出C3转移酶能选择性抑制Rho而不影响其它鸟嘌呤三磷酸酶活性，在脊髓损伤的小鼠模型中，C3转移酶能促进胸脊髓半切除后的轴突的生长及运动功能恢复。Rho抑制剂在动物脊髓损伤模型中的神经保护作用也得到证实，Rho抑制剂赛生灵已经在Ⅰ/Ⅱa临床试验阶段用于脊髓损伤后的干预治疗，并且获得了较好的结果。在这篇综述里，我们将简要介绍Rho信号通路及Rho-ROCK抑制在脊髓损伤治疗中的作用。
关键词： Rho信号通路 Rho-ROCK抑制 脊髓损伤 治疗 -
盐酸法舒地尔对大鼠心肌损伤组织中Cx43表达的影响
目的 观察盐酸法舒地尔(HF)对大鼠心肌损伤组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨其保护心肌组织的机制.方法 将24只SD大鼠随机分成空白组、脂多糖(LPS)组、LPS+ HF组各8只.LPS+HF组腹腔注射HF 30 mg/kg预处理0.5h后,尾静脉注射LPS 1 mg/kg;LPS组腹腔注射HF等量生理盐水预处理0.5h后,尾静脉注射LPS 1 mg/kg;空白组腹腔注射HF等量生理盐水预处理0.5h后,尾静脉注射LPS等量生理盐水.尾静脉注射后6h处死大鼠,取左心室心肌组织,分别采用Western blot法、荧光定量PCR法检测心肌组织中的RhoA/ROCK信号通路关键蛋白ROCK1、Cx43蛋白及mRNA.结果 与空白组比较,LPS组ROCK1 mRNA及蛋白表达增加(P均＜0.01),Cx43 mRNA及蛋白表达降低(P均＜0.01);与LPS组比较,LPS+HF组ROCK1 mRNA及蛋白的表达下降(P均＜0.01),Cx43 mRNA及蛋白表达增加(P均＜0.01).结论 盐酸法舒地尔通过RhoA/ROCK信号通路调节心肌组织中Cx43的表达,从而减轻LPS诱导的心肌损伤.
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Rho信号通路在周期性张应力诱导人牙周膜细胞骨架重排中的作用
目的 探讨周期性张应力对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)骨架重排的影响及Rho信号通路在其中的作用.方法 应用FX-5000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLCs施加周期性张应力,幅度为10％,频率为0.1Hz,加载时间为6h和24h.以未加载的细胞作为对照组.应用倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞免疫荧光染色和共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin的变化,并应用Western blot检测Rho通路相关蛋白的表达变化.用Rock的特异性抑制剂Y-27632预处理细胞后,在0.1 Hz,10％幅度条件下,加载6h和24 h,检测细胞骨架蛋白F-actin的变化和Rho信号通路相关蛋白的表达变化.结果 与静态组相比,周期性张应力诱导hPDLCs细胞骨架重排差异有统计学意义,Rho信号通路Rock和p-cofilin蛋白表达增加(P＜0.05).Rock的特异性抑制剂Y-27632可以降低Rock(P ＜0.05)和p-cofilin蛋白表达和细胞骨架重排.结论 周期性张应力可促进体外培养的hPDLCs细胞骨架重排,Rho信号通路参与了此过程.
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骨髓间充质干细胞移植抗大鼠肝纤维化的作用及机制
目的：探讨骨髓间充质干细胞（ MSCs ）移植对大鼠肝纤维化模型的作用与机制。方法分离大鼠MSCs培养传代至第4代。采用大鼠腹腔注射四氯化碳制造肝纤维模型。将造模成功SD大鼠60只，随机分为3组，每组20只：（1）对照组：鼠尾静脉注射等量的生理盐水；（2） MSCs 组：鼠尾静脉注射MSCs 悬液；（3）诱导组：鼠尾静脉注射经肝细胞生长因子（HGF）诱导14 d后的MSCs悬液。于移植后第1周、2周、3周、4周分别处死大鼠5只，检测大鼠血清透明质酸（ HA）、层黏蛋白（ LN）、Ⅳ型胶原水平；光镜下观察肝组织纤维化程度；分别用PCR法及Western检测大鼠肝脏Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA基因及其蛋白质表达水平。结果（1）诱导组与MSCs组的纤维化程度评分随着时间延长逐渐下降，且在第4周诱导组评分明显低于MSCs组（ P＜0．05）。（2）移植3周后各组血清HA、LN、Ⅳ型胶原含量均显著下降，4周时诱导组和MSCs组各指标含量明显低于对照组，并且诱导组低于MSCs组（ P＜0．05）。（3） MSCs移植后诱导组、MSCs组大鼠肝脏组织Col-Ⅰ、RhoA、Cdc42、Rac1 mRNA和蛋白表达均随时间延长而下降，移植4周时诱导组各项指标明显低于MSCs组和对照组（ P＜0．05）。结论 MSCs移植可抑制肝纤维化大鼠肝组织中HA、LN、Ⅳ型胶原的分泌，并可下调肝纤维化大鼠肝组织Rho信号通路相关因子RhoA，Cdc42，Rac1 mRNA及蛋白表达。 HGF诱导MSCs后抗大鼠肝纤维化作用显著增强。
