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牙龈卟啉单胞菌FtsZ的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)丝状温度敏感蛋白质(FtsZ)的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响,阐明PgFtsZ GTPase的功能区域,为牙周病的防治提供实验依据.方法:将质粒pEZ1 (WtPgFtsZ,含野生型PgFtsZ的基因)、pYW1(Z△C01,从PgFtsZ的C末端去除73个氨基酸残基的变异型)、pYW2(Z△C02,从PgFtsZ的C末端去除128个氨基酸残基的变异型)、pYWN1(Z△N01,从PgFtsZ的N末端去除43个氨基酸残基的变异型)和pYWN2(Z△N02,从PgFtsZ的N末端去除205个氨基酸残基的变异型)分别导入E.coli BL21(DE3)pLysS中表达目的蛋白,然后分离和纯化WtPgFtsZ、Z△C01、Z△C02、Z△N01和Z△N02,将pET3a载体导入E.coli BL21 (DE3) pLysS中作为空白对照.采用Malachite green assay法检测Wt PgFtsZ、Z△C01、Z△C02、Z△N01和Z△N02的GTPase活性,沉淀法检测体外聚合功能,光学显微镜下观察Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs过表达时E.coli细胞形态变化.结果:除Z△N01外,Z△C01、Z△C02和Z△N02的GTPase的活性值均较Wt PgFtsZ降低(P＜0.05),10 mmol·L-1 CaCl2可使Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs的活性下降(P＜0.05);除Z△N02以外,10 mmol·L-1 CaC12均可诱导Wt PgFtsZ、Z△C01、Z△C02和Z△N01的体外聚合反应.Wt PgFtsZ、Z△C01和Z△C02在E.coli细胞中过表达时,细胞呈细长丝状,与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli相比细胞明显变长;Z△N01和Z△N02在E.coli中过表达时,E.coli细胞形态与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli细胞形态相似.结论:PgFtsZ N末端的Z△N01和Z△N02之间的162个氨基酸残基及C末端的128个氨基酸残基与PgFtsZ的GTPase活性有关,二价阳离子Ca2能抑制PgFtsZ的GTPase活性,促进其体外聚合的功能.
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N末端B型钠尿肽原检测与临床应用
N末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)由日本学者1988年从猪脑分离出来,因而得名.主要来源于心室,是一种很有价值的心功能标志物.本文主要介绍N末端B型钠尿肽原在体内生成过程,检测方法 ,检测意义以及临床应用等.
