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NRP1生物学功能及其与肿瘤放射敏感性关系的研究进展
神经菌毛素1 (NRP1)是神经菌毛素(NRP)家族的重要成员之一,通过与血管内皮生长因子(VEGF)、信号素(Sema)和其他多种细胞因子间的相互作用影响肿瘤细胞的辐射抗性.本文总结了NRP1在相关领域的新研究进展,并对NRP1的结构、表达、生物学功能和与肿瘤放射敏感性的关系等方面作一综述.
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鼠神经菌毛素1蛋白的真核表达及其鉴定
目的 制备重组鼠神经菌毛素1(mNRP1)蛋白.方法 将表达载体pCMV3-mNRP1-flag(pCMV-mNRP1)转化大肠杆菌DH5α感受态,扩增重组质粒;随后将pCMV-mNRP1转染哺乳动物细胞株HEK293,间接免疫荧光法(IrA)及western blot法鉴定重组蛋白mNRP1(flag-mNRP1)的表达.结果 IFA及western blot结果显示重组质粒转染HEK293后,flag-mNRP1获得有效表达,融合蛋白相对分子质量约为120000.结论 重组蛋白mNRP1在真核表达系统中获得成功表达,该蛋白的获得为进一步研究NRP1的生物学功能提供有效的生物材料.
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抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用
目的:研究抗人神经菌毛素1 (neuropilin 1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用.方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平.细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95％、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleavedcaspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱.结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡.
