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奶牛乳房炎致病大肠埃希菌的分型及外膜蛋白酶OmpT的抗原性验证
目的 对奶牛乳房炎致病大肠埃希菌(E.coli)进行分型及外膜蛋白酶T(outer membrane protease,OmpT)的抗原性验证.方法 采用凝集试验测定黑龙江省分离的84株致病E.coli的O血清型,PCR扩增种系分类群标记基因法对84株Ecoli进行分型；经BLAST比对筛选ompT基因后,PCR验证ompT基因的普遍性；克隆A、B1、D群代表株ompT基因,测序后进行同源性比对；构建B1群E coli 2002-1株ompT基因重组表达质粒pET-32a-ompT,转化E.coliRosetta,IPTG诱导表达；表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,Westem blot法鉴定重组蛋白的抗原性.结果 84株奶牛乳房炎致病E.coli中共鉴定出血清型51株,覆盖42个O血清型,归属A种系进化群10株,占11.90 ％;B1种系进化群74株,占88.10％；无肠外强致病的B2和D群.各型E.coli均可扩增出ompT基因.4亚群代表株ompT基因具有高度保守性,同源性达97％以上.重组表达质粒pET-32a-ompT经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约55 000,诱导4h,目的蛋白的表达量高,约占菌体总蛋白的29.8％.纯化的重组OmpT蛋白纯度为87.6％,与4亚群E.coli免疫血清均可发生特异性反应.结论 种系进化是对奶牛乳房炎致病E.coli分型的理想方法,外膜蛋白酶OmpT在E.coli各种系进化群中抗原性良好,可作为研制E.coli蛋白亚单位疫苗的候选抗原.
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我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测
目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.结果在分离的猪源大肠杆菌中,LEE毒力岛基因检测结果为:2.2%(22/1 007)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性,0.5%(5/100 7)的菌株eaeA阳性.HPI毒力岛基因检测结果为:10.6%(107/1 007)的菌株irp2和fruA基因扩增阳性,2.1%(21/1007)的菌株irp2阳性;其中有2株irp2和ler基因扩增阳性,有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性,1株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性;在128个HPI阳性分离株中,O93和O107血清型菌株分别占定型菌株的15.7%(13/83)和12.0%(10/83).结论 2.7%的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7%的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型.
关键词： 猪源大肠杆菌 O血清型 强毒力岛 肠细胞脱落位点毒力岛
