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柯萨奇病毒A组16型实壳病毒颗粒与空壳病毒颗粒免疫原性的比较
目的 比较柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)实壳病毒颗粒(full particle,FP)和空壳病毒颗粒(empty particle,EP)的免疫原性.方法 以CVA16病毒株CVA16-L731感染Vero细胞,采用10层细胞工厂培养工艺培养病毒,收获液经离心纯化后,用甲醛灭活,获得灭活纯化的CVA16-L731 FP和EP.采用BCA法检测CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度,4％ ～ 12％ SDS-PAGE、Western blot及透射电镜对CVA16-L731 FP和EP进行鉴定.以氢氧化铝为佐剂,分别以EP、FP、EP/FP为抗原,于第0、14、28天经后肢肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,于0、7、21、35、49、63、77、91d对小鼠进行眼眶采血.采用微量中和试验法检测免疫小鼠血清中和抗体滴度,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体滴度,母传抗体保护试验检测CVA16-L731 FP和EP的垂直保护效果.结果 纯化后的CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度分别达到420和150 μg/ml;CVA16-L731 FP可见4条相对分子质量分别约为34 000(VP1)、26 000(VP2)、24 000(VP3)和8 000(vP4)的条带,CVA16-L731 EP可见3条相对分子质量分别约为36 000 (VP0)、34 000(VP1)和24 000(VP3)的条带;CVA16-L731 FP和EP的纯度均可达95％;CVA16-L731 VP1兔多抗可与FP及EP的VP1、CVA16-L731 VP2兔多抗可与FP-VP2及EP-VP0发生特异性免疫反应;CVA 16-L731FP和EP分别为内部不可被磷钨酸负染的FP致密圆形颗粒和内部可被磷钨酸负染的黑色EP圆型颗粒.小鼠免疫试验结果显示,第1次免疫后各抗原免疫组小鼠血清中和抗体阳性率均为100％;第2次免疫后血清中和抗体滴度和血清特异性IgG水平均显著升高;第3次免疫后血清中和抗体滴度均无明显变化,但血清特异性IgG水平均明显升高;第3次免疫后的63 d内,血清中和抗体滴度均无显著变化.各抗原免疫组乳鼠存活率均为100％.结论 CVA16-L731 FP和EP均能诱导小鼠持续产生较高水平的血清中和抗体和特异性IgG抗体,且母传抗体可保护2日龄乳鼠抵抗CVA16-S315的致死性攻击,为CVA16疫苗的研制提供了实验依据.
关键词： 柯萨奇病毒A组16型 中和抗体 垂直保护
