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可溶性白介素-13 受体α2文献资料
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小鼠sIL-13Rα2基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
目的 克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因.方法 提取小鼠脾脏细胞总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母GS115(his4)菌株,进行目的 蛋白的诱导表达.表达的蛋白经SDS-PAGE和Western blot,进行分析.结果 重组表达质粒pPICZα-A/sIL-13Rα2经酶切鉴定,表明目的 基因为正向插入.重组酵母菌的PCR鉴定结果显示,目的 基因片段已插入酵母染色体中.目的 蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,每升发酵液约含2 mg重组蛋白.重组蛋白可与兔抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应.结论 已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠sIL-13Rα2基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础.
关键词： 可溶性白介素-13 受体α2 毕赤酵母 克隆 表达
