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天然抗体库文献资料
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抗白念珠菌人源性单链抗体库的构建及筛选
目的 构建多样性良好的抗白念珠菌人源性单链抗体库,筛选抗白念珠菌特异性的噬菌体抗体.方法 从20份人外周血淋巴细胞(包括正常成年人5份、新生儿5份和白念珠菌感染恢复期患者10份)中提取总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(V_H)和轻链(V_L)可变区基因,以重叠延伸PCR法将V_H和V_L拼接成scFv基因,克隆人噬菌粒载体pCANTAB-5E中,电转化大肠杆菌XLI-Blue,构建人源抗白念珠菌天然噬菌体抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体.结果 构建的人源性抗白念珠菌天然噬菌体抗体库库容为2.8 ×10~9.多样性良好.共筛选出18个阳性克隆.结论 已成功构建了1个多样性良好的抗白念珠菌人源性噬菌体抗体库,为筛选有效治疗白念珠菌和耐药性白念珠菌感染的药物提供了条件.
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人抗体Fab段天然抗体库的建立
目的: 提取健康人外周血淋巴细胞的mRNA, 利用反转录PCR方法, 建立一个大容量的人抗体Fab段的天然抗体库.方法: 收集健康者外周血, 提取淋巴细胞, 以淋巴细胞mRNA为模板, 扩增人抗体Fab段, 连入载体pComb3内, 利用电转化的方法, 构建噬菌体抗体库.结果: 终建立了重链库为1.73×107, 轻链库为8.52×104的天然抗体库, 并利用酶切鉴定计算出实际库容为重链库1.21×107, 轻链库4.26×104, 所以理论上所建天然噬菌体抗体库总的库容量可以达到5.15×1011.结论: 成功构建了一个大容量的完全人源化的天然抗体库.
