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细胞荧光转化灶法检测狂犬病病毒滴度
目的 应用细胞荧光转化灶(fluorescence focus units assay,FFU)法检测狂犬病病毒滴度.方法 将狂犬病病毒稀释后接种BSR细胞,培养22 ～ 24 h,用FITC标记的抗狂犬病病毒特异性抗体进行染色,计数病毒感染细胞的荧光灶数,计算病毒滴度.采用乳鼠半数致死量(median lethal dose,LD50)法和建立的方法分别测定14批狂犬病病毒滴度,分析两者间的相关性;取同一份病毒液,于不同时间点检测3次,每个时间点重复检测6次,验证方法的重复性;取3份滴度不同的病毒液,由2个操作者在不同时间重复测定3次,验证方法的中间精密性;将同一份病毒液按2倍梯度稀释,共9个稀释度,分别检测病毒滴度,重复测定3次,确定该方法的线性范围.应用建立的方法检测38批CTNCEC株狂犬病病毒滴度.结果 乳鼠LD50法测定14批狂犬病病毒的-LgLD50值范围为4.20～8.19,FFU法LgFFU值范围为3.76～7.69,两种方法检测结果趋势相同,线性回归相关系数R-Sq(调整)=96.1％,存在良好的正相关性;同一个时间点检测6次及不同时间点检测3次的CV值均小于2.00％;两个操作者在不同时间重复测定3次的CV值均小于8.00％,两个操作者之间的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05);样品浓度与LgFFU呈良好的线性关系,R-Sq(调整)=99.3％,线性范围为2.26～6.12.38批CTNCEC株狂犬病病毒滴度平均LgFFU在3.63～7.69之间,SD值在0.021 ～0.57之间,CV值小于10.00％.结论 建立的细胞FFU法准确性、重复性、中间精密度好,该方法可用于检测狂犬病病毒滴度.
