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3种支原体检测方法的比较
目的 比较PCR法、酶法和DNA荧光染色法3种支原体检测方法的灵敏度.方法 支原体阳性的BSR细胞培养上清10倍系列稀释后(10-1～ 10-8),接种至支原体阴性的Vero细胞上,盲传培养5代,每代每个稀释度的样品分别采用PCR法、酶法和DNA荧光染色法检测支原体,并以支原体阴性的Vero细胞作为阴性对照.结果 10倍系列稀释的阳性样品盲传1代,PCR法能检测到10-4,酶法和DNA荧光染色法能检测到10-3;盲传2代,3种方法均能检测到10-4;盲传3代后,3种方法均能检测到10-5,且检测的支原体滴度不随盲传代次的增加而增加.结论 待检样本盲传3代后的支原体用3种方法均可检出,检测灵敏度一致.PCR法与酶法检测支原体准确、快速、简便易行,可作为DNA荧光染色法(支原体检测的金标准)的补充手段.
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生物制品中支原体检定方法的验证及统计学评价
目的确定稳定、准确而可靠的支原体检测方法.方法采用培养法与DNA荧光染色法分别检测已知阴阳性样品,对各组检测结果进行比较,验证其试验内及试验间重复性;检测待检样品,分别验证它们的可靠性.并用统计学方法评价它们的准确性及诊断价值.结果培养法试验内、间重复性均在95%以上,可靠性Kappa值为0.857,试验稳定性优于荧光法.而荧光法灵敏度较高.两种方法同时检测相同待检样品时,检测结果符合率为93.1%,两种方法联合检测的试验内及试验间重复性均在90%以上,可靠性Kappa值为0.88,并且其诊断指标(尤登指数、阳性似然比、验后概率及灵敏度、特异度)均较高,尤其是阳性似然比为293,而其验后概率为99.2%.用此联合系列检测方法共检测了61批次生物样品,有10批次检出有支原体污染.结论两种方法联合检测支原体重复性、可靠性及准确性指标均较高,是稳定、准确并可靠的检定方法.
