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7TR蛋白文献资料
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与A549细胞相关的旋毛虫抗原蛋白7TR单链抗体的筛选
目的 筛选可与A549细胞相互作用的抗旋毛虫7TR单链抗体.方法 PCR法克隆旋毛虫7TR基因,连接至表达载体pET-32a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后,将表达的7TR蛋白进行复性及亲合层析纯化;以纯化后的旋毛虫7TR蛋白为抗原,筛选Tomlinson(I+J)人源噬菌体单链抗体库,筛选并纯化阳性抗体,免疫荧光试验检测抗体与A549细胞的结合活性.结果 重组表达质粒pET-32a-7TR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的旋毛虫7TR蛋白相对分子质量约50 000.共获得2株稳定分泌抗旋毛虫7TR蛋白单链抗体的E.coli HB2151菌株,命名为4C7和8G5;8G5可与重组7TR蛋白发生特异性结合,具有良好的反应原性,也可与A549细胞发生特异性结合.结论 筛选出了与A549细胞具有结合活性的抗7TR单链抗体,为后续的临床应用奠定了基础.
