首页 > 文献资料
-
重组免疫毒素EBI3-Luffin P1原核表达质粒的构建、表达及其生物学活性
目的 构建重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,纯化后初步检测其生物学活性.方法 从质粒pET-32a-EBI3中扩增EBI3基因,与合成的Luffin P1基因连接,克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白经亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性,体外试验初步鉴定其生物学活性.结果 重组质粒pET-32a-EBI3-Luffin P1经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组EBI3-Luffin P1蛋白相对分子质量约为50 000,主要以包涵体形式存在,诱导8h表达量可达菌体总蛋白的44％；纯化的重组蛋白纯度约为98％,可与EBI3蛋白免疫小鼠血清发生特异性反应,并可显著抑制小鼠脾脏细胞分泌IFNγ.结论 成功构建了重组免疫毒素EBI3-Luffin P1的原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为进一步研究其在缓解、治疗免疫性疾病及红白血病中的作用奠定了基础.
-
广西壮族人群EBI3基因rs6613A/T,rs4905A/G多态性分布特点
目的:分析广西壮族人群EBI3基因rs6613A/T、rs4905A/G多态性分布特点.方法:采用单碱基延伸的PCR技术对168例广西壮族人群EBI3 rs6613 A/T和EBI3 rs4905A/G进行多态性检测,对比国际人类基因组计划(HapMap)公布的中国北京人、日本人、非洲人和意大利人的SNP分型数据,分析5个人群rs6613 A/T、rs4905A/G位点的基因型和等位基因频率差异.结果:在广西壮族人群中,EBI3基因rs6613 A/T位点AT基因型常见,约为49.4％;T等位基因频率高,约为52.1％;rs4905A/G多态性位点AC基因型常见,约为48.2％;C等位基因频率高,约为50.9％.EBI3基因型及等位基因频率分布于性别无显著相关性(P＞0.05).广西壮族人群EBI3基因rs6613A/T位点基因型和等位基因频率与北京人差异无统计学意义(P＞0.05),但与非洲人、日本人、意大利人差异具有统计学意义(p＜0.05);EB-13基因rs4905A/G位点基因型和等位基因频率与北京人和日本人差异无统计学意义(P＞0.05),但与非洲人和意大利人比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:EBI3基因rs6613 A/T和EB-13 rs4905A/G多态性位点基因型和等位基因在广西壮族人群中的分布频率与其他种族和地区人群相比存在差异,这种差异可能是导致某些疾病在不同人群发病率和临床表现存在差异的原因之一.
-
新型免疫抑制因子白细胞介素35与自身免疫性疾病
白细胞介素35(IL-35)是近发现的新型免疫抑制/抗炎因子,是IL-12家族成员之一,它是由IL-12α、Ebi3两个亚基组成的二聚体蛋白,主要由调节性T细胞(Treg)组成性分泌,它对于Treg细胞功效的发挥是必需的,IL-35通过诱导调节性T细胞扩增、抑制效应细胞如Th17细胞增殖,明显抑制实验性结肠炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎等自身免疫疾病症状.本文阐述了IL-35作用机制及其在自身免疫性疾病中的调控机制,为寻找新的治疗靶点提供新思路.
