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P30黏附素文献资料
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肺炎支原体P30黏附素基因的原核表达及初步应用
目的 构建肺炎支原体P30黏附素基因原核表达质粒并进行表达;以纯化的rP30蛋白为抗原,建立间接斑点-ELISA(dolt-ELISA)法,用于评价rP30蛋白在肺炎支原体(MP)感染诊断中的价值.方法 以MP基因组DNA为模板,PCR扩增P30基因,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)/P30,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;Western blot检测表达产物的反应原性;以纯化复性后的rP30蛋白为抗原,建立问接dolt-ELISA法,对40份临床疑似肺炎支原体感染患儿血清进行检测.结果 表达的rP30蛋白相对分子质量约为52 000,表达母约占菌体总蛋白的13%,主要以包涵体形式存在,经Ni2+-NTA树脂纯化后,纯度约为93%.Western blot证实,rP30蛋白可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应.用rP30蛋白建立的间接dolt-ELISA法,其敏感性和特异性分别为95.45%和72.22%,准确性为85%.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了rP30蛋白,为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法.也为进一步探讨P30蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础.
