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双阴性T细胞活化自然杀伤细胞促进小鼠暴发型肝炎的发生发展
目的 检测双阴性T(double negative T,DNT)细胞对自然杀伤(natural killer,NK)细胞功能的影响,初步探讨其在3型鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus strain 3,MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎(fulminant viral hepatitis,FVH)模型中发挥的作用.方法 通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导FVH,尾静脉转移过继FVH小鼠脾脏DNT细胞,观察小鼠生存时间和肝脏组织病理学改变,流式细胞术检测小鼠肝脏NK细胞CD69表达情况.磁珠分选肝脏DNT细胞和NK细胞,共培养24 h后,检测NK细胞CD69、胞内干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的表达水平,利用乳酸脱氢酶释放实验检测NK细胞对原代肝细胞的杀伤作用.结果 转移过继DNT细胞,FVH小鼠生存时间缩短,在三天内全部死亡.转移过继组小鼠肝脏NK细胞CD69表达比例较对照组显著升高[(80.60±5.56)％比(4.53±4.82)％,P<0.05].肝脏DNT细胞和NK细胞以10:1比例共培养,NK细胞CD69表达比例较NK单独培养显著增加[(23.1±3.7)％比(4.53±4.82)％,P<0.05],TNF-α表达水平升高[(8.9±2.3)％比(3.0±0.2)％,P<0.05],NK细胞对原代肝细胞的杀伤活性明显增强[(7.6±0.5)％比(3.7±0.4)％,P<0.05].结论 DNT细胞可促进NK细胞活化和TNF-α表达,增强NK细胞对肝细胞的杀伤作用,可能为DNT细胞参与FVH发生发展的机制之一.
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调节性T细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠暴发型肝炎模型中作用的初步探讨
目的 检测调节性T细胞(Tr)在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的比例变化及细胞因子表达,初步探讨Tr在该疾病模型中的作用.方法 通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,观察小鼠的生存时间,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,利用苏木精-伊红(HE)染色法检测肝脏病理学改变,分离感染不同时间点外周血、脾脏以及肝脏中的淋巴细胞,利用流式细胞术来检测Tr的比例以及细胞因子IL-10表达水平.结果 BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,全部在3～6d内死亡,血清ALT、AST水平随着感染时间延长逐渐升高,HE染色显示肝脏组织炎症及坏死程度逐渐加重,流式细胞术检测发现随着感染时间延长,小鼠肝脏中的Tr的比例明显升高.同时肝脏Tr分泌细胞因子1L-10的比例以及肝脏组织IL-10的mRNA水平逐渐升高.结论 MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中Tr在肝脏中的比例和功能显著升高,这种代偿性升高提示Tr可能发挥调节机体过度免疫反应的功能.
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MHV-3诱导暴发性肝炎小鼠肝组织KCNJ15的表达变化
目的 研究病毒感染所致的急性肝衰竭模型中离子通道基因KCNJ15表达水平,探讨该疾病模型中KCNJ15的变化及其与疾病进程的关系.方法 利用MHV-3病毒诱导的Balb/cJ小鼠暴发型肝炎模型,采用定量PCR和免疫组化技术分别从基因及蛋白水平检测肝脏KCNJ15表达水平,并应用流式细胞术检测肝脏淋巴细胞亚群KCNJ15表达.结果 随着MHV-3感染时间的延长,肝组织中KCNJ15表达水平逐渐增高,以感染后72小时为显著.在肝脏CD4+T细胞,KCNJ15蛋白表达水平于48小时显著升高,达到25.17±7.68%,与0h(3.92±1.33%)相比差异具有统计学意义(P<0.001),随后于72小时回落;肝脏表达KCNJ15的CD8+T细胞比例变化与CD4+T细胞趋势一致,于48h达到37.08±8.73%,与0h(6.98±3.48%)相比有显著差异(P<0.001);而表达KCNJ15的肝脏NK细胞比例则从7.72±1.34%上升到感染后24小时的峰值19.80±4.25%(P<0.001),随后回落.结论 肝组织及肝脏淋巴细胞过表达KCNJ15可能参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤过程.
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T细胞抗原受体γδ+T细胞在小鼠暴发型肝炎模型中的作用
目的:T细胞抗原受体(TCR)γδ+T细胞是一种表型和功能独特的T淋巴细胞亚群.通过检测TCR γδ+T细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的比例变化,初步探讨TCRγδ+T细胞在该疾病模型中的作用.方法:通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,利用流式细胞术来检测小鼠外周血、肝脏及脾脏TCRγδ+T细胞的比例变化,并进行统计学分析.结果:BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,全部在3～6天内死亡,小鼠外周血、脾脏及肝脏中的TCR γδ+T细胞占CD3+T细胞的比例均在感染后48小时发生显著升高(P＜0.05).MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中TCR γδ+T细胞的比例显著升高,与疾病严重程度呈正相关.结论:TCR γδ+T细胞可能在小鼠暴发型肝炎发生发展中发挥重要作用,为进一步研究小鼠暴发型肝炎的发病机制提供更充分的理论基础.
