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骨髓间充质干细胞传代扩增培养与干细胞干性的维持关系的研究
目的 建立一种体外分离、培养骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的方法,研究BMMSCs传代扩增培养与干细胞干性的维持关系.方法 采用全骨髓细胞贴壁培养法对大鼠BMMSCs进行分离、培养、传代.采用倒置显微镜观察各代细胞的形态,通过流式细胞术(FACS)观察各代BMMSCs干细胞干性,通过免疫荧光检测各代BMMSCS在肝硬化模型的表达.结果 大鼠BMMSCs呈均一的成纤维细胞样.连续传代干细胞始终保持着旺盛的生长力及扩增力.FASC结果表明,CD29、CD44、CD90的表达率随着传代的进行逐渐增高,P5-P6时表达高,之后其表达率逐渐下降,免疫荧光检测发现P5-P6代干细胞在大鼠肝硬化模型中表达强.结论 随着传代BMMSCs的干性逐渐增强,传代至P5-P6时干细胞干性强,随着传代的继续其干性逐渐下降.
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大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究
目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的可行性.方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征,MTF法绘制生长曲线,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物.用80 ng/ml aFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs 分化,镜下观察细胞形态特征,免疫荧光染色方法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的表达.结果:大鼠BMSCs贴壁生长,呈梭形,多角形.第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形,活性无明显差异.细胞周期显示94.34％ BMSCs处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力.FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性.诱导6h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin表达阳性,继续诱导发现双极和多极细胞增多,诱导6d后相互连接成网状,成典型的神经元样细胞,NSE表达阳性.结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的BMSCs,细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性.经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能,NSCs能进一步分化为神经元样细胞.
关键词： 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁培养法 诱导分化 神经干细胞 酸性成纤维细胞生长因子 -
全骨髓贴壁培养兔骨髓间充质干细胞的初步研究
目的:探讨兔骨髓间充质干细胞作为组织工程种子细胞修复骨缺损的可能性.方法:选取2月龄约2.5 kg重健康新西兰兔8只,采用全骨髓贴壁培养法体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,通过倒置相差显微镜观察、MTT检测、细胞贴壁率检测观察细胞生物学特性.结果:全骨髓贴壁培养法培养出的原代骨髓间充质干细胞活力良好,细胞数量经传代后扩增,且细胞纯度提高,但细胞扩增速度较慢.结论:全骨髓贴壁培养法简便易行,能有效的在体外获得原代骨髓间充质干细胞.所提取的细胞活性良好、纯度较高,能用作组织工程种子细胞治疗骨缺损.
