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新一代高通量测序技术在遗传相关性智力障碍诊断中的应用
智力低下的病因复杂且大多尚未明了,大部分智力低下属遗传性,具有高度特异性.根据遗传特点将智力低下原因分为:染色体数目和结构异常、代谢缺陷、单基因缺陷、非综合征智力低下.因此快速有效地去诊断智力障碍是遗传诊断学的一大挑战.传统的诊断方式如:Southern印迹、连锁分析、染色体核型分析技术、PCR、微阵列-比较基因技术均因各自的缺陷不能在临床上得到有效推广.1987年,美国ABI公司推出第一台自动化测序仪-ABi370的问世实现了基因诊断史上质的飞跃.但由于一代测序通量低、成本高,终将面临淘汰.在此基础上,以高通量、低成本为特点的二代测序全面发展,与传统技术相比二代测序适用于大规模测序,适用于病因不明的突变基因检测,对遗传性智力障碍可能致病基因进行并行测序,向着快速有效地诊断智力障碍迈进一大步.
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甲状腺相关性眼病静脉血单个核细胞差异表达microRNA的初步筛选
目的 以T淋巴细胞在甲状腺相关性眼病(TAO)发生发展中的重要作用作为切人点,筛选出具有意义的microRNA.方法 实验研究.收集对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各3例患者的外周静脉血,提取人外周血单个核细胞(PBMC),采用新一代高通量测序(NGS),筛选出TAO患者(包括TAO静止期组和TAO急性期组)与对照者差异表达的microRNA.然后采用实时荧光定量PCR技术,在对照组、TAO静止期组和TAO急性期组各5例的扩大样本中对上述筛选出的microRNA予以t检验验证.结果 根据测序结果筛选出差异有统计学意义,且相差倍数＞2的microRNA,TAO静止期组与对照组比较共18个,TAO急性期组与对照组比较共31个.2个TAO患病组共同与对照组表达差异有统计学意义的microRNA为miR-19a-5p、miR-30c-2-3p、miR-548c-5p、miR-6718-5p,且均呈现明显上调趋势.实时荧光定量PCR验证结果与测序结果基本相符.结论 TAO患者PBMC中存在microRNA表达差异,miR-19a-5p、miR-30c-2-3p、miR-548c-5p、miR-6718-5p是潜在的TAO免疫诊断学标记物,部分可能参与TAO的免疫学发生发展机制.
