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不同致病型的三株IBV与chAPN体外结合能力的比较
目的:比较不同致病型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)IBV与鸡氨肽酶N体外结合能力的差异.方法:将已构建的pET-32a-chAPN转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果.表达的His-chAPN纯化后进行western-blotting验证,应用酶促反应检测其活性.以不同稀释度的纯化chAPN包被ELISA板,加入经过荧光定量PCR方法定量的含有相同数量病毒粒子的三株不同致病型IBV(呼吸型M41、肾型S-03和腺胃型A2-2),测定三株与chAPN的结合能力.结果:pET-32a-chAPN在受体菌内成功表达,主要以包涵体的形式存在.经纯化复性的重组His-chAPN,Western blotting分析显示其具有良好的抗原性,酶促反应显示该重组重组His-chAPN与天然的具有良好的生物活性.ELISA结果显示chAPN与三株IBV均能结合,其结合能力为A2-2＞S-03＞M41,并表现为剂量依赖性.结论:不同致病型IBV与chAPN的体外结合力有一定差异.
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IBV青岛腺胃分离株(SD/97/02)S1蛋白基因的序列测定和分析
参考Genbank上发表的IBV S1纤突蛋白基因序列,设计了一对引物,对鸡传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)RNA进行RT-PCR扩增.将PCR产物克隆入pMD18-T载体中进行序列测定和分析.序列分析表明,该毒株的S1基因的G+C%含量较少,为37.0%,存在HindⅢ,BamHI,BgIII,SacI和SalI位点,无EcoRI位点,与其他毒株的同源性在87.02%-94.21%之间,在第154～429nt处为高度的变异区;将基因序列翻译成氨基酸后,假定的S1蛋白由540个氨基酸组成,等电点8.24,在蛋白质内部存在18个Cys,在S1与S2蛋白之间的剪切位点为HRRRR,这与大多数IBV毒株(RRF/SRR)不一样,有三个区域的氨基酸序列高度保守;169～181aa,230～250aa,485～506aa;与其他毒株进行抗原性比较后发现,在该毒株的320～326aa及390～401aa处的抗原表位消失,而在325～345aa、379～389aa处则出现了很强的抗原表位;第438～444aa处,其他IBV毒株(除ZJ971株外)原来存在的强抗原位点在本毒株中消失;在53～65位的氨基酸抗原性与其他毒株相比明显变弱.
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IBV广东分离株GD05 S1基因的克隆、鉴定及其表达
鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Brochitis virus,IBV)属于冠状病毒科冠状 病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.近年来,由于新的I BV变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失 [1, 2]}.IBV的基因组为单股RNA,主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(S)、膜蛋白(M) 和 核衣壳蛋白(N),其中S蛋白成熟裂解为S1和S2两个蛋白亚基.S1蛋白是IBV的主要免疫原 基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用 [1,3].
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鸡传染性支气管炎病毒变异机制的研究进展
鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB),是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.病鸡表现为咳嗽、喷嚏、发出气管啰音.幼鸡流鼻液,蛋鸡产蛋数量和质量下降,肉鸡食欲不振,肾型病鸡肾肿大、苍白,有大量尿酸盐沉积.鸡不分年龄、性别和品种均易感,但主要侵害1～4周龄的幼鸡[1].
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IBV江西分离株JX/WTF09的致病性研究
从江西省吉安市农户家疑似肾型传染性支气管炎的死鸡中分离到一株病毒(命名为JX/WTF09).经鉴定,JX/WTF09分离株的确为IBV,EID50为10-5.84/0.1ml,致死率是50％,Q-PCR显示此IBV毒株容易在鸡的肾脏繁殖,其次是肺、肝脾和气管,侵噬组织范围比较广.
