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线粒体大麻素受体1在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响
目的:探讨线粒体CB1受体(mitochondrial cannabinoid receptor1,mtCB1)在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响.方法:原代培养新生的Wistar大鼠海马神经元,将培养至第8天的海马神经元采用随机数字表分为5组(n=60):正常组(N组):正常培养,不做任何处理;缺氧复氧组(H/R组):采用氧糖剥夺法构建海马神经元缺氧复氧损伤模型,缺氧6h,复氧20 h;缺氧复氧组+ACEA+AM251组(H/R+ACEA+AM251组):缺氧6h结束后立即加入ACEA和AM251,终浓度分别为1μmol/L、10μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+ACEA+ Hemopressin(H/R+ ACEA+ Hemo组):缺氧6h结束后立即加入ACEA和Hemopressin,终浓度分别为1 μmol/L、10 μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+赋形剂组(H/R+V组):同样于缺氧6h结束后立即加入二甲基亚砜(DMSO),终浓度＜0.1％,复氧20h.使用激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的浓度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡诱导因子(AIF)、线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1,细胞凋亡相关蛋白细胞色素C(Cytc)和Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)的表达.结果:与N组相比,H/R组、H/R+ACEA+AM251组、H/R+ACEA+Hemo组和H/R+V组的细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率、以及AIF、Drp1、Fis1、Cytc、ROCK1蛋白的表达水平均明显增加(P＜0.05);与H/R组相比,H/R+ ACEA+Hem组上述各检测指标明显降低(P＜0.05),H/R+ACEA+AM251组和H/R+V组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:线粒体CB1受体(mtCB1受体)可能通过降低细胞内ROS的含量来减少细胞内Ca2+浓度和ROCK1的表达,进而抑制线粒体分裂,并终减轻海马神经元缺氧复氧损伤.
