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NAMPT真核表达载体构建及其对肝癌细胞增殖的影响
目的:为探索烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)对肝癌细胞增殖的影响,构建pcDNA3.1 (+)-NAMPT真核表达载体.方法:以正常肝细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到NAMPT全长序列,经酶切、连接、转化等步骤构建真核表达载体.重组质粒经酶切鉴定及测序验证后,用脂质体转染法转染肝癌细胞MHCC-97H和正常肝细胞HL-7702,免疫印迹检测NAMPT蛋白表达情况;WST实验检测过表达NAMPT后对MHCC-97H和HL-7702增殖的影响.结果:真核表达载体pcDNA3.1 (+)-NAMPT构建成功,转染HL.-7702和MHCC-97H细胞后,NAMPT蛋白表达水平较空白组分别升高了83%和180%;过表达NAMPT可促进细胞增殖,而抑制NAMPT活性后,细胞增殖被抑制(P<0.001).结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 (+)-NAMPT,并发现NAMPT表达水平与细胞增殖密切相关,为进一步探索NAMPT表达在肝癌细胞增殖的分子作用机制和筛选新的肿瘤药物靶点奠定了基础.
关键词: 尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT) 细胞增殖 肿瘤代谢 载体构建 -
Nampt 与糖尿病并发血管病变相关性的研究进展
尼克酰胺磷酸核糖转移酶( Nampt)是生物合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( NAD)的关键限速酶, Nampt通过调节NAD的生成从而调控Sirt1的活性,参与细胞的分化、增殖及凋亡等过程。该文对Nampt与糖尿病并发血管病变相关性的研究进展作一综述。