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ARG1基因对人胚肾细胞293砷染毒前后增殖及凋亡的影响
目的:观察ARG1基因对不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)染毒后的293细胞的增殖及凋亡的影响,并讨论ARG1的抗砷性.方法:将ARG1表达质粒pcDNA3.1-ARG1及空载体对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质(Lipofectamine2000)介导转染293细胞后,荧光共聚焦显微镜观察细胞转染率;将实验组pcDNA3.1.ARG1-293细胞、空白对照组pcDNA3.1-293细胞及阴性对照组293细胞用不同浓度的NaAsO2浓度染毒48h后,使用MTT法检测ARG1基因对砷染毒后293细胞的增殖的影响;将实验组、空白对照纽及阴性对照组按不同浓度NaAsO2染毒,加入Annexin V FITC/PI凋亡试剂,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.结果:(1)荧光共聚焦显微镜观察转染结果显示转染率可达75-85%;(2)NaAsO2在1-8 μ mol/L时其对实验组细胞增值的抑制率明显低于对照组,而在浓度>8μ mol/L时则没有明显差异;(3)实验组细胞在NaAsO2浓度<8 μ mol/L其凋亡率明显低于对照组.结论:ARG1能够降低NaAsO2对293细胞增值的抑制率,减轻其对293细胞的促凋亡作用,主要是在低浓度时发挥作用.
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ARG1基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路的影响
目的 观察ARG1基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路表达的影响,探讨其在肿瘤细胞耐药中的作用.方法 取pcDNA3.1-ARG1-293T细胞(观察组)、pcDNA3.1-293T细胞(空白组)、293T细胞(对照组),均以0、1、4、8 μmol/L的NaAsO2染毒处理48h,采用Western blot检测JNK、ERK蛋白.结果 JNK表达量在转染前后各组均随着NaAsO2浓度的升高而增加,但观察组JNK明显低于空白组、对照组(P均＜0.05);观察组ERK表达量在NaAsO2浓度1、4mol/L随浓度升高而增加,在8μmol/L表达量有所下降,但各浓度仍均高于空白组、对照组(P均＜0.05).结论 ARG1基因可能通过参与ERK信号通路的激活,抑制JNK信号通路的表达,破坏MAPK信号通路对细胞增殖凋亡的精确调节,参与肿瘤细胞耐药的产生.
