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FXR1真核表达载体的构建与表达及其对神经节苷脂浓度的影响
目的:构建脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体并检测其对神经节苷脂(GM1)浓度的影响.方法:以pYESTrp3-FXR1为模板,利用PCR扩增FXR1基因,PCR产物经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得的阳性克隆进一步酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1 (-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,采用Western blot检测FXR1的表达情况,同时采用ELISA试剂盒检测细胞内GM1的浓度.结果:PCR扩增产物为1.9 Kb的片段,与FXR1基因大小相符,阳性克隆经双酶切后获得两条分别为5.4 Kb和1.9 Kb的片段,测序结果与GeneBank中序列相同.构建成功的重组质粒pcDNA3.1 (-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,细胞中FXR1的表达增加,同时有效提高了细胞内GM1的浓度(P＜0.05).结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 (-)-FXR1,FXR1的表达增加可以提高SH-SY5Y细胞中的GM1浓度,这些为后续深入研究FXR1基因在神经组织发育中的调控功能及其在脆性X综合征(FXS)中的作用机制奠定了基础.
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脆性X相关蛋白Ⅰ的研究进展
脆性X相关基因Ⅰ(FXR1)发现于1995年,位于3号染色体3q28.其产物脆性X相关蛋白1(FXR1P)与脆性X智障蛋白1(FMR1P)、脆性X相关蛋白2(FXR2P)形成一个RNA结合蛋白家族.目前认为这三种蛋白能输送mRNA分子并调控其翻译过程.FXR1的翻译产物(FXR1P)分子中存在两个KH结构域和一个RGG结构域,这两种结构域与FXR1P分子的RNA结合作用有关.FXR1P的表达具有较高的组织特意性,在横纹肌中表达高.合适的动物模型对于一种蛋白的功能研究具有十分重要的意义,目前,FXR1敲除的各种动物模型如小鼠、斑马鱼、非洲爪蟾的近亲Xenopus tropicalis已经在不同的实验室建立.本文主要介绍了FXR1P的结构特点、功能及其实验动物模型.
