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MiR-381下调Hes1表达调控神经干细胞增殖和向神经元的分化
目的:探讨miRNA-381在神经干细胞(neural stem cell,NSCs)的体外增殖、分化中的作用及相关机制.方法:采用光镜观察法、免疫组化法对原代获取及诱导分化后的NSCs予以鉴定;QPCR及Western blot法检测miRNA-381、nestin、β3-tubulin-Ⅲ和Hes1的mRNA及蛋白表达;CCK-8法检测不同时间点NSCs的增殖情况;荧光素酶报告基因法验证miR-381对Hes1野生型及突变型3’非编码结合区的靶向作用.结果:原代培养细胞呈明显的神经球形态,且高表达nestin蛋白,经bFGF诱导后则高表达β-tubulin-Ⅲ;miR-381转染后,NSCs中miR-381、nesfin、β3-tubulin-Ⅲ的mRNA和蛋白水平均明显升高(P＜0.001),免疫荧光法也进一步验证miR-381转染后的NSCs其β-tubulm-Ⅲ的荧光强度显著增强;此外,miR-381转染24h、48h及72h后,NSCs的增殖能力均高于阴性对照组(p24h＜0.01,p48h＜ 0.001,p72h ＜0.001);荧光素酶法结果显示miR-381能显著降低野生型Hes1载体的3’非编码区的荧光素酶活性,而Hesl基因载体的突变型3'UTR的荧光素酶活性不受到miR-381的影响(P＜0.001);另外,miR-381过表达能明显降低Hes1蛋白的表达;而二者共转染的NSCs增殖能力在转染后24 h、48 h及72 h,均明显低于单纯miR-381转染组(P＜0.01或p＜0.001);同时,共转染后β-tubulmⅢ的mRNA及蛋白水平均明显低于单纯miR-381转染组(P＜0.001).结论:miR-381通过下调Hesl表达促进NSCs的增殖和向神经元的分化.
