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scFv-GCN4文献资料
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单链抗体scFv-GCN4在大肠杆菌中的重组表达及活性检测
目的:重组表达融合GST或MBP标签的单链抗体scFv-GCN4,对其进行分离纯化,并检测其生物学活性.方法:构建pBAD-MBP-scFv-GCN4及pBAD-GST-scFv-GCN4表达载体,使用大肠杆菌(Escherichia coli) Topl0菌株表达并亲和纯化重组蛋白MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4.构建pET30a-Nus-GCN4载体,使用E.coli BL21 (DE3)菌株表达重组蛋白Nus-GCN4及Nus.以重组的GCN4为特异性抗原,通过Pull-down技术和Western Blot技术,检测MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4的抗体活性及特异性.结果:重组菌株E.coli Top 10可高效表达可溶性的MBP-scFv-GCN4和GST-scFv-GCN4蛋白,通过亲和纯化,均得到了高纯度的重组蛋白.重组菌株E.coli BL21(DE3)可高效表达可溶性的Nus与Nus-GCN4蛋白.Pull-down及Western Blot结果显示,重组蛋白MBP-scFv-GCN4及GST-scFv-GCN4均可以高效、特异地识别重组的GCN4抗原.结论:重组抗体GST-scFv-GCN4及MBP-scFv-GCN4均可在E.coli中高效表达,并且具有良好的抗体活性及特异性.
