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特异性eIF-4E siRNA重组腺病毒构建及其对人卵巢癌细胞SKOV-3转移相关能力的影响
目的:构建表达真核细胞起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF-4E)特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其对人卵巢癌细胞SKOV-3体外转移能力的影响.方法:应用基因重组技术将eIF-4E siRNA序列构建于腺病毒载体pLP-Ade-X,经包装细胞包装后得到高滴度重组腺病毒pLP-Ade-4EsiRNA(psiE).将腺病毒psiE感染SKOV-3细胞,用定量PCR进行eIF-4E基因表达检测,然后应用transwell小室法观察对细胞侵袭和运动能力的影响,同时检测感染后细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果:病毒检测结果与预期相符,real-time PCR可检测到感染重组腺病毒psiE后SKOV-3细胞没有eIF-4E基因表达;病毒感染后transwell小室法检测到SKOV-3细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(均为P＜0.01);此外病毒感染的SKOV-3细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低.结论:封闭eIF-4E基因表达对人卵巢癌细胞SKOV-3的侵袭和运动都有抑制作用,其作用机制可能与VEGF、MMP-2、MMP-9表达相关.
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地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响
目的 研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况.方法 取对数生长期的SKOV-3细胞(细胞数为5×104/mL)分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吸光度(A490值)并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40 μmol/L浓度的试验组培养48 h的抑制率高,达(45.25±3.12)%.流式细胞仪检测显示,地塞米松处理后可引起G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势.结论 地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡.
关键词： 地塞米松 人卵巢癌细胞SKOV-3 细胞凋亡 -
刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响
目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×10~7/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×10~(10)/L,6×10~(10)/L,12×10~(10)/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A_(490nm)值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×10~(10)/L数量组72 h抑制率高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48 h达到凋亡高值(18.23%),48 h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验组培养不同时项的SKOV-3细胞出现不同时期凋亡特征性改变.琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带.结论:弓形虫速殖子培养上清对体外培养SKOV-3细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导SKOV-3细胞凋亡.
关键词： 刚地弓形虫 人卵巢癌细胞SKOV-3 细胞凋亡
