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稳定转染的HaCat细胞系文献资料
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14-3-3σ干扰逆转录病毒载体的构建及其稳定转染HaCat细胞系的建立
目的:构建14-3-3σ干扰逆转录病毒载体,建立稳定转染的HaCat细胞系.方法:人工合成14-3-3σ基因干扰序列并定向插入到pSuper-retro-neo-EGFP质粒,并在STBL3菌内进行质粒扩增,刷选阳性克隆,酶切测序鉴定,转染293FT细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒载体,将逆转录病毒栽体感染HaCat细胞后Western免疫印迹法、Real-time PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pSuper-retro-neo-EGFP-si14-3-3σ;干扰质粒稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光,Western免疫印迹法和Real-time PCR法表明14-3-3σ表达明显抑制.结论:成功构建了14-3-3σ干扰的逆转录病毒载体,并构建了其稳定转染的HaCat细胞系.
关键词： 14-3-3σ 逆转录病毒 稳定转染的HaCat细胞系
