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诱变型内皮抑素文献资料
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膀胱癌细胞系中诱变型内皮抑素对Bcl-2蛋白表达影响的研究
目的 研究诱变型内皮抑素对T-24膀胱癌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响.方法 运用定点诱变技术,将人内皮抑素25 ～ 31位氨基酸由RGIRGAD改为RGDRGD后,合成诱变型人内皮抑素(1～30位氨基酸对应核苷酸序列),连接到质粒pTYB2中,转化至大肠杆菌BL-21(DE3)中表达,几丁质亲和层析树脂一步纯化诱变型内皮抑素,葡聚糖凝胶G15去除DTT后经Tricine SDS-PAGE鉴定诱变型内皮抑素.诱变型内皮抑素作用体外培养T-24膀胱肿瘤细胞后,Western blot检测T-24细胞的Bcl-2蛋白表达量;MTT比色法测定对T-24细胞的增殖抑制情况;流式细胞技术测定T-24细胞的早期调亡情况.结果 通过诱变技术及基因工程方法提取的诱变型内皮抑素其相对分子质量与理论大小一致;Western blot检测结果显示诱变型内皮抑素抑制了T-24细胞的Bcl-2蛋白表达;MTT法显示诱变型内皮抑素对T-24细胞有明显的增殖抑制作用,流式细胞仪检测到细胞凋亡增加.结论 诱变型人内皮抑素(诱变型内皮抑素)能够明显抑制T-24膀胱肿瘤细胞Bcl-2的表达,抑制细胞的增殖,促进早期凋亡.
