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磷酸钙转染文献资料
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阴离子交换蛋白1在HEK293t细胞中的高效表达与鉴定
目的在人胚肾HEK293t(293t)细胞高效表达具有阴离子转运活性的阴离子交换蛋白1(AE1).方法用传统磷酸钙转染法将质粒pRBG4-AE1转入293t细胞,免疫荧光及Western blotting验证蛋白表达及正常的细胞膜定位后,应用6-甲氧基-N-(3-磺丙基)喹啉铵(SPQ)观察表达的AE1是否具有阴离子转运活性.结果在293t细胞中,显示AE1高效表达.转染pRBG4-AE1后293t细胞相对于正常以及转染空载体对照组的阴离子交换功能明显增强.结论利用传统磷酸钙转染法,在293t可高效表达具有正常跨膜拓扑结构及阴离子转运活性的AE1,为进一步研究其相关功能奠定了基础.
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磷酸钙法与脂质体法转染HBV全基因组的比较
目的 比较磷酸钙法和脂质体法转染全长HBV基因组的效率及对HBsAg和HBeAg表达的影响.采用真核细胞报告基因SEAP与HBV DNA共转染人肝癌细胞系HepG2.方法 分别将带有分泌性碱性磷酸酶(SEAP)报告基因的质粒、表达绿色荧光蛋白的PCI-EFGP质粒与HBV DNA共转染HepG2细胞.培养后48h计数表达绿色荧光蛋白的细胞,收取细胞培养上清,用ELISA法测定SEAP活性,IMX法检测HBV表面抗原和e抗原水平.结果 脂质体法转染HBV全基因组的效率明显高于磷酸钙转染法,转染后48h的细胞上清表面抗原和e抗原的袁达也明显高于后者.结论 脂质体转染法转染HBV的效率较磷酸钙转染法高,抗原表达水平高,是体外研究HBV的较理想方法.
