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三羟基异黄酮对日本比目鱼(牙鲆)性腺分化的影响
[目的]研究5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein,GEN)对日本比目鱼(牙鲆)生殖腺性分化的作用,并在基因表达上探索其分子机制.[方法]运用日本比目鱼随饲养水温决定其性别的生物学特性,在鱼卵孵化后第30天到第100天性分化敏感期内,在27 ℃水温下饲养,会使幼鱼分化成雄性.同时,分别给予幼鱼投食GEN 10和100 μg/g饲料进行喂养染毒,直到第100天(青年期)和第300天(成年期),分别对各组比目鱼样本做病理组织切片,判断其性别和雌雄比例,并通过原位杂交和RT-PCR分析,探索它们的作用机制.[结果]GEN对27 ℃水温饲养下的比目鱼幼鱼有雌性化诱导作用,两组成年比目鱼雌性分别有不同的百分比:10μg/g组为46.7%,100μg/g组为96.7%,其诱导效应呈现一定剂量依赖性;比目鱼幼鱼出生后第100天时原位杂交实验显示,P450芳香化酶的mRNA在各组的雌鱼卵巢中有明显表达,但在雄鱼精巢中未见表达;而MIS(苗勒氏管抑制物质)的mRNA在各组的雌鱼卵巢中不表达,而在雄鱼精巢中能见到非常明显的表达.RT-PCR实验显示,在雌鱼卵巢中P450芳香化酶的mRNA表达被诱导,而MIS基因表达被抑制,进一步证实了原位杂交的结果.[结论]GEN对日本比目鱼的生殖腺性分化有雌性化诱导作用,其分子机制很可能是通过诱导P450芳香化酶基因表达和抑制MIS的基因表达从而发挥雌激素样干扰作用的.
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双酚A对硬骨鱼性腺分化的作用机制研究
[目的] 研究双酚A对硬骨鱼生殖腺性分化的影响并探索其作用机制. [方法] 运用日本比目鱼由饲养水温决定性别的生物学特性,在鱼卵孵化后的第30天到第100天性分化敏感期内,利用27℃水温使幼鱼都分化成表型的雄性,同时给予幼鱼双酚A 100μg/g的饲料.在第100天(青年期)和第300天(成年期),分别对各组比目鱼样本做病理组织切片,判断其性别和雌雄比例,通过原位杂交分析以及RT-PCR分析,探索它们的作用机制. [结果] 双酚A对27℃水温饲养下的雄性比目鱼幼鱼都有雌性化诱导作用,100μg/g组成年鱼的雌性比例占57%,显著高于27℃对照组(0%);比目鱼幼鱼出生后第100天时,原位杂交分析显示,芳香化酶P450的mRNA在双酚A组的雌鱼卵巢中有明显表达,但在雄鱼精巢中不表达;而苗勒氏管抑制物质(MIS)的mRNA在双酚A组的雌鱼卵巢中不表达,却在雄鱼精巢中能见到极其明显的表达.RT-PCR实验也证实了原位杂交的结果.[结论] 双酚A对日本比目鱼的生殖腺性分化有雌激素样的作用,雌性化作用的机制很可能是诱导了芳香化酶P450的mRNA表达且抑制了MIS的mRNA表达.
