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联合使用表没食子儿茶素没食子酸酯、牛磺酸和三羟基异黄酮对大鼠酒精性肝纤维化的保护作用
目的:研究联合使用表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG),牛磺酸(taurine)和三羟基异黄酮(genistein)对大鼠酒精性肝纤维化的保护作用及其作用机制.方法:Wistar雄性大鼠随机分成6组即正常组,模型组,秋水仙碱组(0.5 mg·kg-1),联合用药低剂量15.625 mg·kg-1组(牛磺酸12.5 mg·kg-1 +EGCG l.875 mg·kg-1+三羟基异黄酮1.25 mg·kg-1),中剂量31.25 mg·kg-1组(牛磺酸25 mg·kg-1+ EGCG 3.75 mg·kg-1+三羟基异黄酮2.5 mg·kg-1),高剂量62.5 mg· kg-组(牛磺酸50 mg·kg-1 +EGCG7.5 mg·kg-1+三羟基异黄酮5 mg·kg-1).除正常组外,其余各组ig乙醇5.0 ～9.5g·kg-,正常组ig给予等量生理盐水,每天1次,连续24周.末次给药24 h后,取血,处死大鼠,采集肝组织;检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),谷氨酰转移酶(GGT),透明质酸(HA),层黏连蛋白(LN)和三型前胶原(PCⅢ)水平的变化,检测肝组织中丙二醛(MDA),羟脯氨酸(Hyp),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),超氧化物歧化酶(SOD),采用免疫组化法检测各组肝组织中α-平滑肌肌动蛋(α-SMA),转化生长因子-β1(TGF-β1)及人母亲DPP同源物3(Smad3)蛋白表达情况,同时做组织学检查,观察肝组织的病理变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠ALT,AST,ALP,GGT,MDA,Hyp,HA,LN,PCⅢ,α-SMA,TGF-β和Smad3显著升高(P＜0.05),SOD和GSH-Px显著降低(P＜0.05);与模型组相比,联合用药可显著降低ALT,AST,ALP,GGT,MDA,Hyp,HA,LN,PCⅢ,α-SMA,TGF-β1和Smad3的表达(P＜0.05),显著升高SOD和GSH-Px的活性(P＜0.05).结论:联合使用表没食子儿茶素没食子酸酯、牛磺酸和三羟基异黄酮用药对乙醇所致的大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与加快自由基清除,减轻脂质过氧化损伤,下调α-SMA,TGF-β1,Smad3表达有关.
关键词： 联合用药 表没食子儿茶素没食子酸酯 牛磺酸 三羟基异黄酮 肝纤维化 -
三羟基异黄酮诱导胃癌原代细胞凋亡的分子机制
目的:探讨三羟基异黄酮诱导胃癌原代细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与基因bcl-2和bax之间的关系.方法:在体外实验中,采用MTT比色法测定三羟基异黄酮对胃癌原代细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL染色法,定性、定量地研究三羟基异黄酮与胃癌原代细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和R T-PCR法检测基因bcl-2和bax的表达.结果:三羟基异黄酮对胃癌原代细胞有明显抑制作用,随三羟基异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强;三羟基异黄酮诱导胃癌原代细胞出现凋亡细胞形态;TUNEL染色法可见,经三羟基异黄酮处理24,48,72,96 h后,胃癌原代细胞凋亡数明显随时间增加(1.25±0.30%→4.97±0.80%,18.44±1.92%,35.18±0.35%,43.93±1.11%,P＜0.05).免疫组织化学发现经三羟基异黄酮处理24,48,72,96 h后,胃癌原代细胞的Bcl-2蛋白阳性率减少(36.34±0.72%→21.62±0.08%,10.60±0.49%,7.21±0.45%,4.54±0.36%,P＜0.01),Bax蛋白阳性率增加(10.73±0.57%→20.63±0.86%,34.3±0.81%,45.96±0.42%,58.61±1.46%,P＜0.01).RT-PCR也发现经三羟基异黄酮处理24,48,72,96 h后,胃癌原代细胞的bcl-2 mRNA条带密度降低,bax mRNA条带密度加强.结论:三羟基异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌原代细胞发生凋亡.
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染料木黄酮对支气管哮喘患者核因子κB和肿瘤坏死因子α的影响
支气管哮喘(简称哮喘)急性发作时患者体内产生活性氧过多导致氧化应激,核因子κB(NF-κB)表达增强致前炎因子释放.异黄酮类抗氧化剂染料木黄酮(5,7,4-三羟基异黄酮)可抑制多种细胞产生活性氧自由基.我们的研究旨在探讨染料木黄酮对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响.
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表皮生长因子受体对支气管哮喘大鼠气道重塑的影响
支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑是气道上皮反复损伤修复导致气道结构的改变,在此过程中表皮生长因子及其受体 (EGF/EGFR) 具有重要作用.我们的实验选用酪氨酸激酶抑制剂4′,5,7-三羟基异黄酮(Genistein,商品名:金转停,河北石家庄荣立药物研究所)阻断EGFR的激活,旨在观察抑制哮喘动物气道上皮EGFR的激活对气道重塑的影响,进一步深化对哮喘发病机制的认识.
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genistein联合顺铂控制肝癌切除术后复发转移的实验研究
目的 研究genistein(三羟基异黄酮)增强顺铂对肝癌切除术后复发转移的抑制作用及其机制. 方法建立模拟人肝癌切除术后肿瘤高转移复发的裸鼠模型,分别给予genistein与顺铂腹腔注射,治疗4周后处死,观察裸鼠肝脏复发肿瘤大小和肺转移情况;用金氏公式计算q值研究两药的协同作用;免疫组化及实时荧光定量PCR检测肝脏复发肿瘤MMP-2蛋白及mRNA的表达.结果 gunistein与顺铂联用较单用组裸鼠肝脏肿瘤复发灶体积减小,肺转移数减少;genistein与顺铂联用在体内对裸鼠肝癌切除术后的复发肿瘤具有相加抑制作用,对肺转移具有协同抑制作用;免疫组化检测复发肿瘤MMP-2的蛋白表达,顺铂组比对照组表达增加(t=26.17、P＜0.05),genistein组和联用组表达比对照组降低(t=5.58,13.90,P＜0.05);实时荧光定量PCR检测genistein组MMP-2 mRNA表达是对照组的0.90倍,顺铂组是对照组的2.06倍,联合组是对照组的0.44倍.结论 genistein可增强顺铂防治肝癌切除术后肿瘤复发转移的化疗疗效;其机制可能与genistein能降低顺铂诱导的MMP-2表达增加有关.
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三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响
目的 探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响.方法 以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100 μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3 H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达.结果 三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P＜0.05),且具有剂量-效应关系;100 μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P＜0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA 的表达显著下调(P＜0.05).结论 三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物.
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三羟基异黄酮对日本比目鱼(牙鲆)性腺分化的影响
[目的]研究5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein,GEN)对日本比目鱼(牙鲆)生殖腺性分化的作用,并在基因表达上探索其分子机制.[方法]运用日本比目鱼随饲养水温决定其性别的生物学特性,在鱼卵孵化后第30天到第100天性分化敏感期内,在27 ℃水温下饲养,会使幼鱼分化成雄性.同时,分别给予幼鱼投食GEN 10和100 μg/g饲料进行喂养染毒,直到第100天(青年期)和第300天(成年期),分别对各组比目鱼样本做病理组织切片,判断其性别和雌雄比例,并通过原位杂交和RT-PCR分析,探索它们的作用机制.[结果]GEN对27 ℃水温饲养下的比目鱼幼鱼有雌性化诱导作用,两组成年比目鱼雌性分别有不同的百分比:10μg/g组为46.7%,100μg/g组为96.7%,其诱导效应呈现一定剂量依赖性;比目鱼幼鱼出生后第100天时原位杂交实验显示,P450芳香化酶的mRNA在各组的雌鱼卵巢中有明显表达,但在雄鱼精巢中未见表达;而MIS(苗勒氏管抑制物质)的mRNA在各组的雌鱼卵巢中不表达,而在雄鱼精巢中能见到非常明显的表达.RT-PCR实验显示,在雌鱼卵巢中P450芳香化酶的mRNA表达被诱导,而MIS基因表达被抑制,进一步证实了原位杂交的结果.[结论]GEN对日本比目鱼的生殖腺性分化有雌性化诱导作用,其分子机制很可能是通过诱导P450芳香化酶基因表达和抑制MIS的基因表达从而发挥雌激素样干扰作用的.
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4',5,7-三羟基异黄酮抗骨髓瘤细胞增殖机制的研究
目的:为了研究4',5,7-三羟基异黄酮(genistein,Gen)是否能抑制人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株XGI的增殖,研究Gen处理骨髓瘤细胞后B细胞淋巴瘤,白血病.2基因0,c1.2)、bcl-xl、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞间黏附因子1(ICMA-1)基因表达变化及骨髓瘤细胞中核转录因子κB(NF-κB)表达的变化.方法:利用体外培养人MM细胞株XG1,依据剂量梯度分别给予Gen,用噻唑蓝染色法(MTT)观察不同药物浓度的Gen对MM细胞的增殖影响;5、10、15μ/mL Gen与溶剂对照组分别作用XG1细胞48 h后,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测XG1细胞bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因表达;应用5 μg/mL Gen处理XG1细胞,用免疫组织化学法观察Gen处理前后细胞内NF.KB的表达情况.结果:Gen作用XG1细胞48 h,随浓度增加,细胞增殖逐渐下降;5、10、15 μg/mL Gen处理组mRNA的表达均低于溶剂对照组(P<0.05),伴随Gen处理浓度逐渐增加,bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达逐渐下降;Gen能够使NF-κB在XG1细胞内重新分布,胞浆内出现NF-κB表达,胞核内NF-κB表达下降.结论:Gen可能通过下调骨髓瘤细胞核中NF-κB的表达来抑制bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达,进而抑制骨髓瘤细胞的增殖、黏附、转移.
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三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究
目的探讨三羟基异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制.方法建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线;25只Balb/c裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后均分为五组,不同剂量的三羟基异黄酮(0.5、1.0和1.5 mg/kg)、生理盐水和DMSO进行瘤旁注射,透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织凋亡情况,免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况.结果三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用;透射电镜发现三羟基异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;TUNEL染色法发现三羟基异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数(28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%)明显高于生理盐水和DMSO对照组(P＜0.05),而两个对照组(11.8%±0.4%和11.7%±0.4%)之间差异无统计学意义.免疫组化法发现三羟基异黄酮注射组的Bcl 2蛋白阳性细胞率(11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%)明显低于两个对照组(P＜0.05),而两个对照组(19.5%±0.6%和17.6%±1.4%)之间差异无统计学意义;而Bax蛋白阳性细胞率(20.0%±1.2%、24.7%±0.9%和29.3%±1.6%)明显高于两个对照组(P＜0.05),而两个对照组(10.3%±0.4%和10.9%±0.9%)间差异无统计学意义;RT PCR法发现三羟基异黄酮注射组的bcl-2 mRNA条带强度随剂量增大而递减,并明显低于对照组(P＜0.05);而baxmRNA条带强度递增,并明显低于对照组(P＜0.05),而两对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论三羟基异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用,通过下调bcl-2和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡,是其抗胃癌作用的机制之一.
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三羟基异黄酮对兔缺血心肌的保护作用
目的 探讨三羟基异黄酮(GST)对缺血/再灌注(I/R)心肌的保护效果及可能机制.方法 结扎雄兔冠脉左前降支建立心肌I/R模型:心肌缺血40min,然后再灌注2 h.分4组:Sham组:冠脉不结扎;I/R组;GST+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1.0 mg/kg GST;Vehicle+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1 mL二甲基亚砜.检测血清乳酸脱氢酶及肌酸激酶活性,再灌注结束后通过Evans蓝-TTC染色判断心肌梗死范围,TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果 与I/R组及Vehide+I/R组相比,GST+I/R组心肌梗死范围、心肌酶活性及细胞凋亡指数均显著降低(P<0.01),而前两组之间无显著差异.结论 心肌缺血前给予GST能有效地减轻心肌I/R损伤,抗凋亡和减少心肌细胞坏死是其发挥效应的两条途径.
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三羟基异黄酮对豚鼠右心室乳头肌的正性肌力作用
目的 观察三羟基异黄酮(GST)对离体豚鼠右心室乳头肌收缩功能的影响,并探讨其作用机制.方法 将离体豚鼠右心室乳头肌置于装有K-H液的灌流肌槽中,待平衡后,加入各种药物观察乳头肌收缩活动的变化.结果 GST和异丙肾上腺素相似,可增强豚鼠右心室乳头肌的收缩活动,GST(1～100 μmol·L-1)的作用具有明显的剂量依赖性;普萘洛尔(1 μmol·L-1)和异搏定(0.5 μmol·L-1)可明显阻断异丙肾上腺素(1 μmol·L-1)的正性肌力作用,但对GST(50 μmol·L-1)的心肌收缩增强效应无明显改变;GST(1、10 μmol·L-1)对细胞外液Ca2+ 浓度升高而诱发的心肌收缩力增强也无明显影响;它莫西芬(1 μmol·L-1)及SQ22536(1 μmol·L-1)可明显减弱GST的正性肌力作用,bpV(1 μmol·L-1)也可明显阻断GST的这种作用.结论 GST可增强心肌收缩活动,具有正性肌力作用,其作用与心肌细胞膜上的β肾上腺素能受体、钙通道激活、雌激素受体无关,可能与cAMP的胞内信号转导以及酪氨酸激酶途径有关.
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三羟基异黄酮对卵巢去势大鼠延髓神经元保护作用的研究
目的:观察植物雌激素三羟基异黄酮(GST)对卵巢去势大鼠延髓神经元的保护作用.方法:行双侧卵巢切除术的雌性大鼠造模,手术10天后皮下注射GST 200 μg/(kg·d)治疗.连续给药6周后,取动物脑的延髓部位检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并作超薄切片电镜分析.结果:GST组与去卵巢对照组(OVX组)比较,MDA含量减少、SOD活性增加(P＜0.01),形态学观察OVX组延髓神经元超微结构有明显的病理变化,而GST组能明显改善神经元的损伤,维持神经元结构的完整性.结论:GST对延髓神经元有明显的保护作用,其机制可能与清除氧自由基有关.
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三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞凋亡的研究
目的 探讨三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系.方法 采用MTT比色法测定三羟基异黄酮对EC-109细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL染色法研究三羟基异黄酮与EC-109细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和RT-PCR法检测bcl-2和bax的表达.结果 三羟基异黄酮对EC-109细胞有明显抑制作用,随浓度增加和培养时间的延长而增强;三羟基异黄酮诱导EC-109细胞出现凋亡细胞形态;TUNEL染色法可见.经三羟基异黄酮处理24、48、72、96h后,EC-109细胞凋亡数随时间明显增加.免疫组织化学发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2蛋白阳性率减少,bax蛋白阳性率增加.RT-PCR也发现经处理24、48、72、96h后.EC-109细胞的bcl-2mRNA条带密度降低,bax mRNA条带密度加强.结论 三羟基异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡.
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三羟基异黄酮通过AMPK和mTOR信号通路对宫颈癌细胞抑制作用的研究
目的:探讨三羟基异黄酮对人宫颈癌Caski细胞株生长凋亡的影响及机制.方法:磺酰罗丹明B(SRB)比色法检测不同浓度三羟基异黄酮(GEN)干预对Hela,SiHa,Caski,HeLa-S3,HeLa229及C-33A等宫颈癌细胞株生长增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期和线粒体膜电位变化情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞内一磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶(AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关基因的信使核糖核酸和蛋白水平的表达.免疫沉淀法检测三羟基异黄酮对Caski细胞结节性硬化症基因1/结节性硬化症基因2 (TSC2/TSC1)复合物组装的影响.结果:三羟基异黄酮的抗癌效能次序是Caski＞Hela＞C-33A＞SiHa＞HeLa-S3＞HeLa229;三羟基异黄酮彻底阻滞了Caski细胞周期进程,并诱导其凋亡.三羟基异黄酮没有改变G1调节蛋白的mRNA表达水平,表明蛋白翻译受到抑制,但转录水平没受到影响.三羟基异黄酮诱导组装TSC1/TSC2,并通过抑制包括mTOR(Ser2448)、p70S6K(Thr421/Ser424和Thr389)和4E-BP1(Thr37/ Thr46和Thr70)等蛋白质磷酸化导致细胞蛋白质合成受阻.三羟基异黄酮干预还引起宫颈癌细胞AMPK活性升高.AMPK抑制剂复合物C显著逆转三羟基异黄酮干预效果的结果表明AMPK通路是三羟基异黄酮抑制宫颈癌细胞增殖过程中的关键途径.此外,线粒体膜电势和线粒体含量下降表明三羟基异黄酮引起线粒体氧化应激.结论:三羟基异黄酮干预Caski细胞后,引起线粒体应激反应,激活AMPK信号通路,使线粒体膜电位下降、TSC1/TSC2复合物形成增加及mTOR介导的蛋白质翻译通路受阻,终导致宫颈癌Caski细胞周期G1期阻滞,并诱导其凋亡.
关键词： 三羟基异黄酮 宫颈癌 腺苷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 G1期阻滞 -
三羟基异黄酮和17-β雌二醇对自由基缩血管效应的影响
目的:研究自由基引发血管收缩的机制,并通过血管静息张力的变化探讨三羟基异黄酮和17-β雌二醇对自由基缩血管效应的影响.方法:制备猪冠状动脉血管环,固定于恒温肌槽内,待平衡后,加入各种药物观察血管张力的变化.结果:内皮完整的血管环在O2-作用下产生明显的收缩,去除内皮后无明显反应.1μmol·L-1三羟基异黄酮对O2-引发血管收缩有明显的抑制作用(P＜0.01,n=16),1μmol·L-1 17-β雌二醇无明显作用.H2O2使去内皮血管环产生明显的收缩作用,对内皮完整的血管环缩血管效应不明显,30 μmol·L-1三羟基异黄酮可明显抑制H2O2的缩血管作用.结论:三羟基异黄酮可明显抑制O2-和H2O2的缩血管效应,其作用明显强于17-β雌二醇.
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三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用
目的 探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组.应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达.结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15 μmol·L-1和20 μmol·L-1 GST处理组与5 μmol·L-1和10 μmol·L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01).结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关.
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染料木黄酮抗肿瘤侵袭与转移研究进展
大豆提取物染料木黄酮(genistein)是异黄酮类化合物,其化学名为5,7,4-三羟基异黄酮,为一种天然的植物雌激素.近年来关于染料木黄酮的动物和体外实验资料都证实它是一种潜在的肿瘤化学预防剂.
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抑制 SIRT1表达促进三羟基异黄酮诱导HeLa 细胞凋亡的实验观察
目的：利用HeLa宫颈癌细胞株探讨去乙酰化酶SIRT1是否参与三羟基异黄酮的抗癌作用。方法以培养的HeLa细胞为研究对象，实验分对照组（ A组）、三羟基异黄酮组（ B组）、SIRT1抑制剂Splitomicin处理组（ C组）及Splitomicin＋三羟基异黄酮组（ D组）。采用MTT法测定不同浓度三羟基异黄酮对HeLa细胞生长的抑制情况；Hoechst 333258荧光染色检测各组细胞凋亡情况；流式细胞术检测细胞周期分布情况；实时定量PCR及Western blot检测各组细胞内SIRT1表达水平变化。结果 B、D组细胞抑制率、细胞凋亡率、细胞周期分布比较均有统计学差异， A、B组细胞内SIRT1 mRNA及蛋白表达率比较均有统计学差异（P＜0．05或＜0．01）。结论抑制SIRT1可提高三羟基异黄酮对HeLa细胞的杀伤作用， SIRT1可能是三羟基异黄酮抗肿瘤作用的靶点。
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三羟基异黄酮对肝癌H22细胞移植瘤的抑制作用及机制探讨
目的 探讨三羟基异黄酮抑制肝癌H22细胞移植瘤的效果及机制.方法 将60只小鼠随机分为A、B、C、D、E、F组,各10只.均皮下接种肝癌H22细胞建立荷瘤小鼠模型.至肿瘤平均直径≥0.5 cm时,B、C、D、E、F组分别在瘤旁隔日定时注射生理盐水、1.5 mg/kg二甲基亚砜(DMSO)及含1.0、2.0、4.0 mg/kg三羟基异黄酮的DMSO溶液,注射液体体积均为0.2 ml.共5次.末次给药24 h后断颈处死小鼠,剥离瘤体测瘤重,并检测凋亡指数(AI)及增殖细胞细胞核抗原(PCNA).结果 与其他组比较,D、E、F组小鼠瘤重均显著降低(P均<0.05),D、E、F组间比较,P均>0.05.与A组相比,B、C、D、E、F组AI均增加,但D、E、F组更显著(P均<0.01).PCNA表达各组间相比P均>0.05.结论 三羟基异黄酮对小鼠H22移植性肿瘤具有一定抑制作用,但无剂量依赖性;其机制主要是促进细胞凋亡、抑制瘤体生长.
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三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响
目的 观察植物雌激素三羟基异黄酮(genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695 MT表达载体转染正常PC12细胞,将细胞分为正常对照组、空载转染组、APP695转染组和GST干预组(5μmol/L、15 μmol/L).采用免疫细胞化学SABC法和免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在PC12细胞中的表达.结果 免疫细胞化学SABC法结果显示,与正常对照组比较,APP695转染组PC12细胞Bax蛋白细胞阳性表达率显著升高[(78.02±1.26)％,P＜0.01)],Bcl-2蛋白细胞阳性表达率则明显降低[(15.40±0.72)％,P＜0.01)]；15 μmol/L GST组与APP695转染组比较,Bax蛋白的阳性细胞表达率显著降低[(22.35±0.49)％,P＜0.01)],而Bcl-2蛋白的阳性表达率明显增强[(68.11±0.24)％,P＜0.01)].Western blot结果表明,APP695转染组与对照组比较Bax蛋白的表达量明显增多,Bcl-2蛋白表达则明显降低；GST各处理组与APP695转染组比较,Bax蛋白的表达量明显降低,Bcl-2蛋白表达显著增强.结论 GST能降低APP695基因转染引起的PC12细胞内Bax蛋白表达的水平,而提高Bcl-2蛋白的表达水平,对PC12细胞产生保护作用.
