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不同n-3/n-6多不饱和脂肪酸构成比对大鼠脂代谢和食欲的影响
目的 研究不同n-3/n-6配比脂肪酸对大鼠食欲影响及其与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)基因表达的关系.方法 58只SD大鼠适应性喂养7天后,尾静脉取血.根据血清总胆固醇(TC)水平随机分为6组:空白组(基础饲料),高脂组(高脂饲料),高脂1:1组(高脂饲料+n-3/n-6=1:1油),高脂1:5组(高脂饲料+n一3/n-6=1:5油),低脂1:1组(脱脂基础饲料+n-3/n-6=1:1油),低脂1:5组(脱脂基础饲料+n-3/n-6=1:5油),喂养45天,观察大鼠摄食与体重增长,并于实验第0、15、30和45天测定血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量.于45天处死动物,取下丘脑,用RT-PCR分别测下丘脑组织中NPY、AMPK-α2 mRNA表达.结果 添加PUFA的四个组血清TC、TG、摄食量、体重及NPY、AMPK-α2 mRNA表达均比高脂组大鼠明显降低(P<0.05).结论 PUFA改善血脂可能是通过影响AMPK表达,从而抑制下丘脑食欲相关基因表达,进而影响血脂代谢.
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染料木素对油酸诱导的HEⅡ4肝细胞脂质沉积的影响
目的 观察染料木素(GEN)对油酸(oleic acid)诱导的HEⅡ4肝细胞脂质沉积细胞模型的作用,以及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的GEN对细胞的毒性；以0.2 mmol/L油酸诱导HEⅡ4肝细胞内脂质大量沉积,给予GEN干预后以GPO·DAOS法检测细胞内甘油三酯(TG)含量,以DCTM法检测细胞内总蛋白含量,用蛋白含量校正细胞内TG含量(TG/蛋白)来评估细胞内脂质沉积情况；Western blotting法检测肝细胞内AMPK及P-AMPK (Thr172)蛋白表达水平,以P-AMPK (Thr172)/AMPK表示AMPK的磷酸化水平.结果 GEN可减少肝细胞内脂质沉积(分别为139.64±18.60、192.20±34.17,P＜0.05),并且提高细胞内AMPK的磷酸化水平(分别为1.93±0.36、0.78±0.27,P＜0.05),而GEN降低细胞内脂质沉积作用可被AMPK阻滞剂CompoundC所逆转.结论 GEN可改善油酸诱导的HEⅡ4肝细胞内脂质沉积,其作用机制与增加AMPK磷酸化水平有关.
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振腹推拿对T2DM大鼠骨骼肌AMPK/Glut4信号链的影响
目的 观察振腹推拿对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠腓肠肌及腹直肌组织AMPK及Glut4基因转录及蛋白表达的影响,探讨其改善T2DM糖代谢的作用机制.方法 24只Wistar大鼠随机取出6只为空白组,其余高脂高糖饮食联合低剂量(35 mg/kg)链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM模型,成模大鼠随机分为模型组、西药对照组及西药推拿组.空白对照组及模型组每日灌胃蒸馏水,西药对照组每日以250 mg/kg标准进行二甲双胍灌胃一次,西药推拿组在相同给药标准基础上每日加用振腹推拿治疗一次.分别在干预第0、2、4、8周测定大鼠FBG水平,干预8周后,测定腓肠肌与腹直肌AMPK以、Glut4基因转录与蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组FBG值在第0、2、6、8周时均显著上升,干预8周后,腹直肌AMPKα及Glut4基因转录及蛋白表达均显著下降,腓肠肌AMPKα2基因转录及蛋白表达均显著下降,腓肠肌Glut4蛋白表达显著下降.与模型组比较,西药组及西药推拿组FBG值在第2、6、8周时均显著下降,西药组腹直肌AMPKα2基因转录显著上升,Glut4基因转录及蛋白表达显著上升,西药推拿组腹直肌AMPKα2及Glut4基因转录及蛋白表达均显著上升,腓肠肌AMPKα2基因转录及蛋白表达均显著上升.结论 在二甲双胍常规治疗基础上,联合振腹推拿可进一步改善T2DM大鼠的FBG水平,其对糖代谢的改善机制与调控骨骼肌AMPK/Glut4信号链有关.
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染料木苷对3T3-L1脂肪细胞分化以及AMPK磷酸化的影响
目的 观察染料木苷(Genistin,GIN)对 3T3-L1 前脂肪细胞细胞分化以及分化过程中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)磷酸化程度的影响.方法 用激素鸡尾酒法诱导 3T3-L1 前脂肪细胞分化,用MTT法观察GIN 对细胞生存率的影响,以油红O染色法镜下观察3T3-L1前脂肪细胞分化的情况,并通过比色分析法检测GIN对细胞内脂滴堆积量的影响;用 Western blotting方法分别检测对照组和给药组细胞分化过程中细胞中AMPK,P-AMPK(Thr172)蛋白表达量,借以计算AMPK磷酸化比率.结果 分化诱导后,对照组脂肪细胞呈典型的成熟脂肪细胞表型,形成"戒指环"结构,经100 μM GIN干预后,脂滴数量减少,体积减小,通过比色分析法量化后显示100 μM GIN可减少胞内脂质的堆积(P＜0.05).与对照组相比,给药组从第4天开始上调p-AMPK(Thr172)/AMPK 比率,并持续到第10天(P＜0.05).结论 GIN可通过激活AMPK抑制3T3-L1脂肪细胞分化.
关键词： 染料木苷 3T3-L1前脂肪细胞 分化 腺苷酸活化蛋白激酶 -
基于 AMPK 的中药有效成分治疗2型糖尿病的研究进展
腺苷酸活化蛋白激酶（ AMP-activated Protein Kinase ，AMPK）在调节细胞和全身代谢中发挥着重要作用，是研究治疗2型糖尿病药物的关键靶点。本文介绍了AMPK的结构及调节方式，并通过检索文献，对通过调节AMPK及其相关信号通路干预2型糖尿病的中药有效成分进行归纳总结。
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电针对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠肝脏腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路相关蛋白表达的影响
目的:观察电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPARγ)蛋白的影响,探讨电针治疗IR的作用机制.方法:从40只雄性SD大鼠中随机选取8只做为空白组,其余通过高脂饮食诱导IR模型,选取24只造模成功的大鼠按随机区组原则分为模型组(8只)、西药组(8只)和电针组(8只).西药组按大鼠体质量以吡格列酮10 mg·kg-1·d-1灌胃,电针组取双侧“丰隆”“三阴交”穴电针治疗,1次/d,均连续治疗2周.透射电镜观察大鼠肝组织线粒体结构,ELISA法检测大鼠血清C肽(C-P)、脂联素(ADP)、瘦素(LEP)、抵抗素(RES)含量,免疫蛋白印迹法检测肝组织AMPK、p38 MAPK、PPARγ的蛋白表达.结果:电镜观察显示模型组肝细胞线粒体形态、结构受损;而西药、电针组线粒体结构得到恢复融合.与空白组比较,模型组大鼠血清C-P、LEP、RES含量显著升高(P＜0.01),ADP含量显著降低(P＜0.01),肝组织AMPK、PPARγ蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),p38 MAPK蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).与模型组比较,电针组、西药组大鼠血清C-P、LEP、RES含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),ADP含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),肝组织AMPK、PPARγ蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),p38 MAPK蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).电针组与西药组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针可明显改善IR大鼠的脂质代谢紊乱,其作用机制可能与电针调节肝组织AMPK/p38 MAPK/PPARγ通路相关,由此下调脂肪酸合成相关酶的活性,使肝组织内合成甘油三酯、胆固醇减少,改善肝组织IR.
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腺苷酸活化蛋白激酶在黄连素诱导人肺腺癌细胞凋亡中的作用机制
目的:探讨黄连素(Ber)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在其中的作用机制.方法:实验分为对照组、Ber(30、60、90μmol/L)组,分别检测各组A549细胞活性、凋亡率、Caspase-3活性,以及p-AMPK通路和凋亡相关蛋白含量的变化.小干扰RNA(siRNA)特异性抑制p-AMPK表达后,Ber(0、60μmol/L)处理细胞24h,重复上述检测.结果:Ber有效抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡(P＜0.05),显著增加Caspase-3活性(P＜0.05),并呈浓度依赖效应;Western blot检测结果显示Ber上调p-AMPK、Bax的表达(P＜0.05),抑制Bcl2的表达(P＜0.05);AMPK siRNA转染显著抑制p-AMPK表达,同时抑制Ber对A549细胞的促凋亡作用(P＜0.05).结论:Ber可有效抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡,此作用可能与上调AMPK表达有关.
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中药复方益糖康对糖尿病大鼠下丘脑和骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶的表达及活性影响
目的:通过观察中药复方益糖康对糖尿病大鼠下丘脑和骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的影响,探讨其改善糖尿病糖脂代谢异常的作用.方法:将Wistar大鼠分为正常组,模型组和治疗组.用Western blot法检测下丘脑及骨骼肌组织AMPK α及AMPKα蛋白的表达,RT-PCR法测AMPKα mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组下丘脑、骨骼肌组织AMPK表达水平及其活性降低(P＜0.05),血糖和血脂水平增高(P＜0.05);与模型组比较,治疗组骨骼肌与下丘脑内AMPK表达水平及活性增高(P＜0.05),并且血糖、血脂水平降低(P＜0.05).结论:中药复方益糖康可以促进糖尿病大鼠骨骼肌组织AMPK表达水平增高,并影响下丘脑AMPK活性,这可能是益糖康改善糖尿病糖脂代谢异常的部分机制.
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AMPK-α/NF-κB信号转导通路在大肠癌多药耐药中的作用及白藜芦醇的干预机制
目的:探讨白藜芦醇通过激活腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK α)抑制NF-κB/P-gp信号通路逆转大肠癌多药耐药的作用机制.方法:采用CCK-8法检测无毒浓度的白藜芦醇对人肠癌HCT116/OXA耐药细胞对奥沙利铂的逆转作用;细胞免疫荧光法检测白藜芦醇对p-AMPK α分布及表达的情况;Western blot法检测白藜芦醇对AMPK α-NF-κB/P-gp信号通路的调控作用;利用RNAi干扰技术沉默AMPK α基因,观察AMPK α介导的NF-κB/P-gp信号通路的调控作用.结果:白藜芦醇能够逆转大肠癌耐药细胞对奥沙利铂的耐药性,增加AMPKα磷酸化水平,抑制大肠癌细胞核内NF-κB的积累及其下游靶蛋白P-gp的表达;AMPK α活性降低能够增加NF-κB在细胞核内的积累及其下游靶蛋白P-gp的表达.结论:p-AMPK α表达下调可通过激活NF-κB信号通路并促进下游靶蛋白P-gp的表达以达到增加大肠癌细胞耐药的目的,而白藜芦醇通过激活AMPK α的表达发挥逆转大肠癌细胞多药耐药的作用.
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基于AMPK能量调节功能探讨中医实热“上火”的发病机制
目的:以腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)为核心探讨实热“上火”人群体内能量代谢的变化,为阐明实热“上火”的发病机制提供参考依据.方法:磷钼酸比色法检测外周血中三磷酸腺苷(ATP)含量,RT-PCR法检测外周血白细胞中AMPK、信号传导及转录激活因子3(STAT3) mRNA含量,Western blot法检测其蛋白表达水平,试剂盒检测细胞耗氧率(OCAR),ELISA法测定血浆中白介素(IL)-6、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子含量.结果:与正常对照组人群比较,实热“上火”组人群外周血中ATP含量显著上升(P＜0.01),外周血白细胞中AMPK蛋白的磷酸化水平显著下降(P＜0.05),OCAR也显著下降(P＜0.05);外周血白细胞中STAT3蛋白磷酸化水平下降(P＜0.05),血浆中IL-6含量有所上升,而IL-17、TNF-α则下降(P＜0.05).结论:实热“上火”状态下,体内能量物质ATP显著增多,AMPK功能受到抑制,引起机体的正反馈调节,出现合成代谢减少,OCAR下降,分解代谢亢进的状态.同时,受AMPK活性下降的影响,体内STAT3活性也随之减弱,炎性细胞因子比例下调,出现反馈性的炎症免疫抑制反应.
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抵挡汤早期干预对糖尿病大鼠腺苷酸活化蛋白激酶信号通路的影响
目的：观察不同时期给予抵挡汤干预对糖尿病大鼠血管内皮细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路相关因子的变化，探讨其调控 AMPK 信号通路介导的线粒体能量代谢对糖尿病大血管病变防御功能的作用机制。方法采用尾静脉注射链脲佐菌素配合高脂饲料喂养制作糖尿病大鼠模型。实验大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组和抵挡汤早、中、晚期组，Western blot 检测胸主动脉内皮细胞 AMPKα1、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）的蛋白表达，ELISA 检测细胞内一磷酸腺苷（AMP）、三磷酸腺苷（ATP）水平，实时荧光定量 PCR 检测胸主动脉组织 Caspase-3、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、Bcl-2的基因表达。结果与模型组比较，抵挡汤早、中期组和辛伐他汀组大鼠胸主动脉 AMPKα1、PGC-1α蛋白表达明显升高（P＜0.05）；抵挡汤早期组和辛伐他汀组 Bcl-2、eNOS 基因表达明显升高（P＜0.05），Caspase-3基因表达明显降低（P＜0.05）；抵挡汤早期组和辛伐他汀组 ATP 水平明显升高（P＜0.05），AMP 水平明显降低（P＜0.05），其中以抵挡汤早期组效果显著。结论抵挡汤早期干预可通过调控 AMPK 信号通路，增强血管内皮细胞线粒体的能量代谢，从而加强血管内皮的防御功能。
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防己黄芪汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨防己黄芪汤治疗胰岛素抵抗的可能作用机制.方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组及西药组各10只,除空白组外其余各组采用高脂饲料饲养12周建立胰岛素抵抗模型.造模成功后中药组按1 ml/100g灌服防己黄芪汤(浓度0.6 g/ml),西药组按1 ml/100 g灌服吡格列酮悬浊液(浓度l mg/ml),模型组及空白组灌服等容量蒸馏水,每日1次,各组连续给药2周.造模后检测各组大鼠葡萄糖输注率(GIR);给药后检测血清游离脂肪酸、脂联素、瘦素、抵抗素含量;油红O染色观察骨骼肌脂肪异位沉积程度;Western-blotting法测定骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白含量. 结果 与空白组比较,模型组大鼠血清游离脂肪酸、瘦素、抵抗素含量及p38MAPK蛋白表达显著升高,脂联素含量、GIR、AMPK蛋白表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,西药组、中药组游离脂肪酸、瘦素、抵抗素含量及p38MAPK蛋白表达显著降低,脂联素含量、AMPK蛋白表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).油红O染色显示,与模型组比较,中药组和西药组大鼠骨骼肌红染颗粒减少,脂质沉积改善.结论 防己黄芪汤可改善大鼠胰岛素抵抗脂质代谢紊乱,调节脂肪因子水平,其机制可能是通过调节AMPK信号转导通路蛋白水平实现的.
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二甲双胍激活AMPK通路减轻饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应
目的 观察二甲双胍对饱和脂肪酸(SFA)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应中炎性因子的影响及探讨其可能机制.方法 SFA干预RAW264.7巨噬细胞建立体外炎性反应模型;实验分为对照组、SFA干预组、二甲双胍+ SFA干预组、AMPK抑制剂Compound C+二甲双胍+SFA干预组;实时定量PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-6蛋白的分泌,Western blot分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平.结果 与对照组比较,SFA干预组RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均显著升高(P＜0.05);与SFA组比较,二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达水平及蛋白分泌水平均降低(P＜0.05),而细胞AMPK的磷酸化水平增强(P＜0.05);与二甲双胍+SFA干预组比,Compound C+二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均升高,AMPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 二甲双胍激活AMPK降低饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-6的分泌.
关键词： RAW264.7巨噬细胞 二甲双胍 饱和脂肪酸 腺苷酸活化蛋白激酶 炎性因子 -
LPL和Angptl4在糖尿病性心脏病发生发展中作用的研究新进展
糖尿病性心脏病是糖尿病的主要并发症,脂质代谢紊乱是糖尿病性心脏病发病机制之一.脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是水解血浆中富含甘油三酯脂蛋白的关键酶.糖尿病早期,机体葡萄糖利用不足、糖耐量降低,LPL水解甘油三酯生成游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)是心肌能量的主要来源.糖尿病中期,心肌细胞启动AMPK-p38MAPK/Hsp25-HPA-Notch信号通路进一步促进FFA生成为心肌供能.糖尿病晚期,过多FFA启动一系列机制诱导胰岛β细胞凋亡,使细胞内产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)增多,通过促进缺氧诱导因子1α(hypoxia induciblefactorl,HIF-1α)合成上调血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,Angptl4)表达,降低LPL活性,从而破坏心肌脂代谢稳态.本文主要综述LPL和Angptl4在糖尿病性心脏病发生发展中的可能作用.
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AMPK 在机体骨骼肌运动代谢适应方面的研究进展
腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）作为机体细胞的“能量感受器”，可通过激活其下游靶蛋白调节组织细胞糖、脂代谢过程。运动适应涉及机体多个系统和器官，其中骨骼肌在机体对运动产生的代谢适应方面的作用为明显。运动作为对机体的一个刺激可活化组织细胞 AMPK，本文将针对 AMPK 在机体组织对运动产生代谢适应方面的新研究进展加以综述，以期为阐明运动防治代谢性疾病的机制提供理论依据。
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人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定
目的对原核体系表达的 CaMKKβ蛋白体外活性进行探索，为针对 CaMKKβ、AMPK 药物研发提供科研基础。
方法克隆人 CaMKKβ基因，建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ，将其转化入 E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内，在16℃、0.02 mmol/L IPTG 条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白，Ni-NTA 纯化6His-CaMKKβ蛋白，并利用 Glo?Max Assay 方法检测其活性。
结果通过基因测序表明 pET28a-CaMKKβ质粒构建成功；重组人 CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高，Ni-NTA 纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上，活性检测结果表明，大肠杆菌体系内表达的人 CaMKKβ蛋白在 CaM/Ca2+存在与否情况下，酶活基本一致。
结论成功构建原核表达载体 pET28a-CaMKKβ，实现重组人 CaMKKβ在原核体系内可溶性表达，活性测定表明原核体系内表达的 CaMKKβ自主酶活性较强，受 CaM/Ca2+影响较小。关键词： 钙-钙调素依赖性蛋白激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 色谱法 亲和 CaM/Ca2+ -
小鼠肺泡巨噬细胞中腺苷酸活化蛋白激酶参与内毒素诱导炎症因子分泌的调控
目的 探讨腺苷酸活化蛋白激酶( AMP-activated protein kinase, AMPK)在小鼠肺泡巨噬细胞由脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导炎症因子分泌中的作用机制. 方法 选择野生型和AMPKα1-/-小鼠原代肺泡巨噬细胞,ELISA(酶联免疫吸附剂测定)方法检测在有无AMPK的激动剂[5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(5-amino-1-β-D-ribofuranosyl-imidazole-4-carboxamide,AICAR)]作用下LPS刺激的细胞上清中肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白细胞介素-1β( IL-1β)分泌;Western blot方法检测AMPKα1、α2在野生型和AMPKα1-/-小鼠肺泡巨噬细胞中的表达, LPS作用下p-AMPKα活性变化. 结果 AMPKα1-/-小鼠肺泡巨噬细胞中LPS刺激的炎症因子分泌显著高于野生型;野生型小鼠肺泡巨噬细胞LPS下调p-AMPKα活性, AICAR显著抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β的分泌. 结论AMPKα1缺失促进了LPS诱导的炎症因子分泌,AMPK激动剂AICAR显著抑制LPS诱导的炎症因子分泌,AMPK参与了小鼠肺泡巨噬细胞中内毒素诱导的炎症因子分泌调控.
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缬沙坦抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞凋亡
目的 研究缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制是否与激活腺苷酸活蛋白激酶相关.方法 将大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)分为5组:①对照(DMSO)组、②血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)100 μmol/L组、③血管紧张素Ⅱ100 μmol/L+缬沙坦(valsartan,Val) 10 μmol/L组、④血管紧张素Ⅱ100 μ,mol/L+缬沙坦10μmol/L+复合物C(Compoud C,CompC)1μmol/L组、⑤血管紧张素Ⅱ100 μmol/L +5-氨基咪哇-4-甲酞胺核糖核普酸(AICAR) 100 μmol/L组,各组细胞予以相应药物处理24h后,用分光光度法检测细胞内Caspase 3活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法检测细胞内AMPK总蛋白及磷酸化水平的变化;免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;WST-1法检测细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA法检测细胞内丙二醛(MDA)活性.多组定量资料比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t.结果 与对照组相比,AngⅡ组细胞凋亡率增加[(45.46±15.40)％和(1.88 ±3.28)％,P=0.002],细胞内ROS的生成增加[(9.24±0.46)和(1.00±0.00),P＜0.01],Caspase 3活性增加[(35.03±3.54)和(13.33±1.79),P＜0.01]、MDA活性增加[(4.32±0.73)和(2.05 ±0.18),P＜0.01],细胞内AMPK的磷酸化水平降低,SOD活性降低[(90.29±14.73)和(136.02±18.82),P=0.001];与AngⅡ组相比,AngⅡ+Val组和AngⅡ+AICAR组细胞凋亡率降低[(24.91±8.46)％和(45.46±15.40)％,P=0.031];[(27.90±4.39)％和(45.46±15.40)％,P=0.038],两组细胞内ROS的生成降低[(2.37±0.05)和(9.24±0.46),P＜0.01];[(2.79±0.31)和(9.24 ±0.46),P＜0.01)],Caspase 3活性降低[(18.08±2.69)和(35.03±3.54),P＜0.01];[(27.83±3.56)和(35.03 ±3.54),P =0.002],MDA活性降低[(3.25±0.55)和(4.32 ±0.73),P=0.017];[(3.46±0.60)和(4.32±0.73),P=0.047],AMPK的磷酸化水平增加,SOD活性增加[(140.71±20.27)和(90.29±14.73),P＜0.01];[(116.73±17.96)和(90.29±14.73),P=0.029];与AngⅡ+Val组相比,AngⅡ+Val+ CompC组细胞凋亡率增加[(43.84±12.00)％和(24.91±8.46)％,P=0.043],细胞内ROS的生成增加[(4.64 ±0.15)和(2.37±0.05),P＜0.01],Caspase 3活性增加[(25.64±3.52)和(18.08 ±2.69),P=0.0u],MDA活性增加[(5.12±0.92)和(3.25±0.55),P＜0.01],细胞内AMPK的磷酸化水平下降,SOD活性下降[(99.48±16.59)和(90.29±14.73),P=0.002].结论 缬沙坦可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能与调节细胞内AMPK的磷酸化水平和ROS、SOD、MDA的活性相关
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脂联素/AMPK在有氧运动预防ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用研究
目的:观察有氧运动对ApoE-/--小鼠动脉粥样硬化(AS)的预防效果,探讨脂联素/AMPK的作用机制.方法:采用8周龄雄性C57BL/6J和ApoE-/-小鼠进行运动预防AS实验,分为14周对照组(C,10只)、14周模型组(H,10只)、14周运动组(HE,10只).运动干预结束后取材比较各组小鼠主动脉管壁的病理变化,检测各组小鼠血脂、血糖和血清脂联素,脂肪组织脂联素mRNA表达,以及腓肠肌AdipoR1、AMPK蛋白表达水平.结果:①C组小鼠体重和脂体比显著低于H组(P＜0.01),脂体比HE组小鼠显著低于H组小鼠(P＜0.01);②C组小鼠主动脉结构正常,HE组小鼠主动脉管壁纤维弹力板和内膜较H组小鼠完好;③C组小鼠血清TC、TG、FFA及FBG水平均显著低于H组小鼠(P＜ 0.01),HE组小鼠FFA、FBG水平均显著低于H组小鼠(P＜ 0.01);④C组小鼠脂肪组织脂联素mRNA表达及血清水平显著高于H组小鼠(P＜0.01),H组小鼠脂肪组织脂联素mRNA表达及血清水平显著低于HE组小鼠(P＜0.05);⑤C组小鼠腓肠肌AdipoR1 、AMPK蛋白表达均显著高于H组小鼠(P＜0.01),HE组小鼠腓肠肌AdipoR1和AMPK蛋白表达均显著高于H组(P＜0.05).结论:有氧运动具有降低ApoE--高脂饮食小鼠AS发生程度的作用,可能与脂肪组织分泌脂联素增多,通过骨骼肌AdipoR1受体/AMPK调节糖脂代谢有关.
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脂联素信号通路分子在非酒精性脂肪性肝病模型构建不同时期的表达变化
目的 研究肝脏脂联素信号通路分子在大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)形成过程不同时期的表达变化,方法 SD-性大鼠24只随机分为4组:正常组N组(6只),模型组M4组(6只),模型组M8组(6只),模型组M12组(6只).正常组给予普通饲料喂养,NAFLD模型组给予高脂饲料喂养.分别于第4周末处死M4组大鼠,第8周末处死M8组大鼠,第12周末处死N组和M12组大鼠.采用HE染色法观察各组大鼠肝组织病理学改变;ELISA检测各组大鼠血清脂联素水平;RT-PCR法检测大鼠肝脏AdipoR2、PPARα的mRNA表达;Westernblot蛋白印记法检测各组大鼠肝脏AdipoR2、PPARα及磷酸化AMPK蛋白表达.结果 肝脏HE染色显示,第12周末时模型组大鼠可见肝细胞肿胀明显,细胞质内可见大量的脂肪空泡,少量肝细胞发生坏死,提示造模成功.ELISA法结果表明,与正常组相比,模型组大鼠第4周末、第8周末、第12周末血清脂联素水平逐渐降低,每两组之间比较差异有显著性(P＜0.05).RT-PCR法结果表明,与正常组相比,模型组大鼠肝脏第4周末、第8周末、第12周末AdipoR2、PPARα的mRNA表达逐渐减弱,每两组之间比较差异有显著性(P＜0.05).Western blot蛋白印记法结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肝脏AdipoR2、PPARα及磷酸化AMPK蛋白表达在第4周末、第8周末、第12周末逐渐减弱,每两组之间比较差异有显著性(P＜0.05).结论 脂联素信号通路分子在NAFLD形成过程中表达逐渐减弱.脂联素信号通路活性逐渐降低可能是NAFLD形成的机制之一.
