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熊果酸对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运及对PPAR-γ的基因及蛋白表达的影响
目的:观察不同质量浓度熊果酸(UA)对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞促进胆固醇流出的影响及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPA R-γ)转运蛋白的表达,探讨可能作用机制.方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,用20 mg·L-1的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育48 h诱导成泡沫细胞,采用油红0染色,光镜下鉴定泡沫细胞形态变化,液体闪烁计数仪检测胆固醇的流出率,并用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及酶联免疫吸附(ELISA)测定PPAR-γ的基因及蛋白表达.结果:巨噬细胞经ox-LDL诱48 h后转化为泡沫细胞,与空白组比较,10,15,20,25 mg·L-1质量浓度UA干预组泡沫细胞的胆固醇流出率上升(P ＜0.01);10,15,20,25 mg·L-1质量浓度UA干预组泡沫细胞内PPAR-γ的基因表达上调(P＜0.01),在一定质量浓度范围内呈剂量依赖性;10,15,20,25 mg·L-1质量浓度UA干预组泡沫细胞内PPAR-γ的蛋白表达增加(P＜0.01),差异有统计学意义.结论:经20 mg·L-1 ox-LDL的诱导后,巨噬细胞分化为泡沫细胞,细胞内脂质大量增加,UA促进巨噬细胞内胆固醇流出,可能与上调细胞内PPAR-γ的表达有关.
关键词： 熊果酸 动脉粥样硬化 RAW264.7巨噬细胞 胆固醇 -
紫菀酮对脂多糖诱导巨噬细胞释放IL-1β,TNF-α及NO的影响
目的:探讨紫菀酮的体外抗炎作用及其机制分析.方法:利用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,通过紫菀酮对其进行干预,采用SunBioTMAm-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测紫菀酮对RAW264.7巨噬细胞增殖的影响;Griess法检测细胞培养上清液中NO含量;ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果:与空白组比较,50 μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率明显高于空白组,0.1,1,10,20,30μmol·L-1紫菀酮组RAW264.7巨噬细胞的增殖抑制率无显著性差异;10,30 μmol·L-1紫菀酮组NO释放量均显著低于脂多糖组;1,10,30 μmol·L-1紫菀酮组IL-1β和TNF-α释放量均显著低于脂多糖组.结论:紫菀酮呈剂量依赖性抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子IL-1β,TNF-α及NO的释放,具有体外抗炎作用.
关键词： 紫菀酮 脂多糖 RAW264.7巨噬细胞 抗炎机制 -
紫菀酮基于NF-κB信号通路的体外抗炎机制研究
目的:探讨紫菀酮体外抗炎作用及其机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎性反应模型,用紫菀酮对其进行干预,实验结束后,Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-ERK1/2、IκB α和iNOS蛋白的表达.结果:与LPS组比较,紫菀酮可显著下调LPS所致炎性RAW264.7巨噬细胞中p-ERK1/2和iNOS蛋白表达(P＜0.05),升高IκB α蛋白的表达(P＜0.05).结论:紫菀酮抗炎作用机制与其下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平,减少IκBα蛋白磷酸化降解和抑制iNOS蛋白表达等环节有关.
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槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响
目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7 巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制.方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+ LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液.Western blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-α mRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量.结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P＜0.01)；TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P＜0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义.结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一.
关键词： 槐定碱 TLR4/MD-2阻断剂 LPS RAW264.7巨噬细胞 TLR4 -
二甲双胍激活AMPK通路减轻饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应
目的 观察二甲双胍对饱和脂肪酸(SFA)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应中炎性因子的影响及探讨其可能机制.方法 SFA干预RAW264.7巨噬细胞建立体外炎性反应模型;实验分为对照组、SFA干预组、二甲双胍+ SFA干预组、AMPK抑制剂Compound C+二甲双胍+SFA干预组;实时定量PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-6蛋白的分泌,Western blot分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平.结果 与对照组比较,SFA干预组RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均显著升高(P＜0.05);与SFA组比较,二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达水平及蛋白分泌水平均降低(P＜0.05),而细胞AMPK的磷酸化水平增强(P＜0.05);与二甲双胍+SFA干预组比,Compound C+二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均升高,AMPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 二甲双胍激活AMPK降低饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-6的分泌.
关键词： RAW264.7巨噬细胞 二甲双胍 饱和脂肪酸 腺苷酸活化蛋白激酶 炎性因子 -
高糖高脂对鼻疽诺卡菌作用于RAW264.7巨噬细胞的影响
目的 在体外培养巨噬细胞RAW264.7的基础上以高糖高脂刺激,检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用后的免疫指标,探讨高糖高脂对巨噬细胞免疫功能的影响.方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组,对照组为常规培养,实验组分为4组:高糖组以50 mmol/L葡萄糖培养,高脂1组以10 mg/L溶血卵磷脂培养,高脂2组以25 mg/L溶血卵磷脂培养,高脂高糖组以50 mmol/L葡萄糖+25 mg/L溶血卵磷脂培养.检测不同条件培养6、12、24、36 h后各组巨噬细胞的细胞活性.5组巨噬细胞分别用以上条件培养24 h后与鼻疽诺卡菌作用,动态追踪检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用1、2、3、4、5、6h后的吞噬率,及作用1、3、6h后诺卡菌对不同细胞组的细胞毒性大小和细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量.结果 高糖高脂培养使巨噬细胞活性降低,培养24 h后各实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).高糖高脂的刺激降低了巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力,高糖组、高脂2组在1、2h,高脂1组在1、2、3h,高糖高脂组在1、2、3、4h处对鼻疽诺卡菌的吞噬率低于对照组(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,鼻疽诺卡菌对各实验组的细胞毒性减低(P<0.05或P<0.01).与对照组相比,高脂1组、高脂2组、高糖高脂组在作用3 h后IL-10的分泌量低于对照组(P<0.05);高糖组、高脂1组在作用1 h后TNF的分泌量低于对照组(P<0.05).结论 高糖高脂培养可降低巨噬细胞的活性,降低巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力,并影响鼻疽诺卡菌对巨噬细胞的毒性作用以及巨噬细胞细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量.
关键词： 鼻疽诺卡菌 RAW264.7巨噬细胞 高糖 溶血卵磷脂 吞噬 -
巨噬细胞膜包裹的PEG-PLGA载雷公藤红素纳米粒靶向治疗重症急性胰腺炎的大鼠体内药效学研究
急性胰腺炎常伴随局部或全身性炎症反应,本研究旨在开发一种雷公藤红素靶向治疗急性胰腺炎的策略.首先,选择小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型巨噬细胞,通过细胞溶胀、机械破坏和密度梯度离心法提取巨噬细胞膜;采用探头超声法制备平均粒径约150 nm左右的PEG-PLGA纳米粒;利用挤膜法将细胞膜挤过400 nm多孔聚碳酸酯膜而制备巨噬细胞膜包裹的PEG-PLGA纳米粒.体内分布研究发现,该细胞膜包裹的纳米粒有很好地胰腺炎症靶向性;与未包膜纳米粒比较,载雷公藤红素巨噬细胞膜包裹的纳米粒对胰腺局部和全身炎症有较好的治疗效果.
关键词： RAW264.7巨噬细胞 PEG-PLGA 纳米粒 雷公藤红素 急性胰腺炎 -
基于UHPLC-QTOF/MS技术RAW264.7巨噬细胞甘油磷脂成分的快速表征
采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱联用技术(UHPLC-QTOF/MS)对RA264.7巨噬细胞甘油磷脂成分进行结构推断,运用修饰后的Bligh-Dyer法提取甘油磷脂,以流动相A:水(含10 mmol.L-1乙酸铵和0.25％乙酸),流动相B:乙腈-异丙醇(1∶1)(含10 mmol·L-1乙酸铵和0.25％乙酸)进行梯度洗脱,在ESI正负离子模式下进行数据采集.本实验推断出82个甘油磷脂成分,其中包括57个磷脂酰胆碱(PCs)、21个磷脂酰乙醇胺(PEs)、3个磷脂酰甘油(PGs)和1个磷脂酰肌醇(PI).本文建立的基于UHPLC-QTOF/MS液质联用技术的RAW264.7巨噬细胞甘油磷脂类成分分析方法快速、简便、可靠.
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黄芪甲苷对苯并芘诱导RAW264.7细胞MMPs表达的保护作用
目的 观察黄芪甲苷(astragaloside IV,ASIV)对苯并芘(benzopyrene,Bap)诱导RAW264.7巨噬细胞MMPs表达的保护作用,探讨腹主动脉瘤防治的可能新策略.方法 应用Western blot法观察Bap对RAW264.7巨噬细胞基质金属蛋白酶-9/12(MMP-9、MMP-12)、NF-κB、TNF-α等表达的变化及黄芪甲苷的作用,利用流式细胞仪观察黄芪甲苷对巨噬细胞ROS表达的影响.结果 Bap能够诱导RAW264.7巨噬细胞MMP-9、MMP-12等金属蛋白酶的表达升高和NF-κB、TNF-α等炎性指标的活化.黄芪甲苷具有降低RAW264.7巨噬细胞因Bap诱导而表达升高的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α,同时具有清除ROS的作用.结论 黄芪甲苷能够降低Bap刺激RAW264.7巨噬细胞引起的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α的表达升高,并具有清除ROS的作用.
关键词： 黄芪甲苷 RAW264.7巨噬细胞 苯并芘 基质金属蛋白酶 -
血红素氧化酶-1基因过表达对RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响
[目的]建立血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)稳定过表达细胞株RAW264.7,探讨HO-1过表达对其增殖活性和细胞凋亡的作用.[方法]用携带小鼠HO-1基因的重组慢病毒感染小鼠RAW264.7细胞,经嘌呤霉素筛选获得HO-1稳定过表达细胞株.细胞分为野生型组(WT)、阴性对照组(NC)和过表达组(Lenti-HO-1).用Real-Time PCR检测细胞中HO-1mRNA的表达.用Western blotting检测细胞中HO-1蛋白的表达.用CCK-8法检测细胞的增殖活性.用流式细胞术检测细胞的凋亡水平.[结果]HO-1慢病毒能促进RAW264.7细胞HO-1 mRNA和蛋白的稳定过表达.Lenti-HO-1组细胞的增殖活性显著低于WT组和NC组(P＜0.05).Lenti-HO-1组凋亡细胞的比例显著高于NC组(P＜0.05).[结论]本研究成功构建了HO-1稳定过表达的RAW264.7细胞株,HO-1过表达能够降低RAW264.7细胞的增殖活性,增加凋亡细胞的比例,其为进一步探讨HO-1在巨噬细胞所参与病理生理机制中的作用奠定了基础.
关键词： 血红素氧化酶-1 RAW264.7巨噬细胞 细胞增殖 细胞凋亡 慢病毒 -
干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分对RAW264.7巨噬细胞吞噬活性的影响
目的 探讨干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对小鼠巨噬细胞功能的影响.方法 以培养液单纯培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为对照,研究干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖对RAW264.7细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、吞噬中性红和致病菌能力的影响.结果 不同浓度磷壁酸和肽聚糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞LDH活性、吞噬中性红能力有明显增强作用,并呈一定的剂量效应.在相同质量浓度时.2种细胞壁组分刺激RAW264.7细胞吞噬中性红能力差异无显著性,但磷壁酸对巨噬细胞RAW264.7细胞内LDH活性的增强作用高于肽聚糖.在受到浓度为50μg/ml的磷壁酸和肽聚糖刺激后,磷壁酸和肽聚糖均能显著增强RAW264.7对致病性大肠埃希菌和肠炎沙门菌的吞噬作用(P<0.01).经过刺激的巨噬细胞与致病菌共孵育1 h后,其吞噬能力达到大值.结论 干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖可以增强小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞内LDH活性及吞噬能力,并具有剂量效应.
关键词： 干酪乳杆菌LC2W RAW264.7巨噬细胞 吞噬活性 细胞壁组分 -
黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞自噬相关基因表达的影响
目的：考察黄连解毒汤含药血清对RAW264．7巨噬细胞自噬的影响，初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：采用大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃干预SD大鼠，制备含药血清；经MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响后，选择各剂量浓度为20％的含药血清干预体外培养的巨噬细胞，采用荧光定量PCR方法检测自噬相关基因Beclin1和mTOR的mRNA表达水平；Western blot检测Beclin1、p－mTOR蛋白的表达变化。结果：与正常对照组血清相比，黄连解毒汤含药血清干预后诱导了Beclin1 mRNA及蛋白的表达，抑制了mTOR mRNA及p－mTOR蛋白的表达。结论：黄连解毒汤含药血清可诱导RAW264．7巨噬细胞自噬相关基因Beclin1的表达、抑制mTOR的表达，这可能是该方抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。
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S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对RAW264.7巨噬细胞亚型分化的影响
目的:探讨S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对巨噬细胞亚型分化的影响及其机制.方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组、SNAP+PBA(4-苯基丁酸)组,采用不同浓度(30、100、300、400、500 μmol/L)的SNAP或300μmol/L SNAP+20 mmol/L PBA对巨噬细胞进行干预24h,应用RT-PCR法检测RAW264.7巨噬细胞亚型分化标志物M1(iNOS,CD86)、M2(Arg-Ⅰ,MR)及CHOP mRNA的表达,应用Western blot技术检测iNOS及ERS通路中相关蛋白CHOP、P-PERK的表达.结果:与空白对照组比较,SNAP组iNOS、CD86、CHOP mRNA的表达均明显降低(P＜0.05),Arg-Ⅰ mRNA表达明显升高(P＜0.05),而MR mRNA表达升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);与300 μmol/L SNAP组比较,300 μmol/L+PBA组iNOS、CHOP mRNA均无明显变化(P＞0.05),CD86 mRNA升高,Arg-Ⅰ、MR mRNA均明显降低(P＜0.05).SNAP组CHOP、iNOS、p-PERK蛋白表达均明显低于对照组(P＜0.05),300 μmol/L SNAP+20 mmol/L PBA组与300 μmol/L SNAP组比较iNOS蛋白、p-PERK、CHOP蛋白表达升高(P＜0.05).结论:NO可能通过内质网应激机制抑制巨噬细胞向M1亚型分化.
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温通活血乳膏对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响
目的 观察温通活血乳膏对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响.方法 将RAW264.7细胞随机分为正常对照组、LPS组、空白对照组、温通活血乳膏浓缩液高、中、低剂量组(250、50、10 μg/mL).样品与细胞共同孵育24 h后,进行相关检测.结果 不同剂量温通活血乳膏对细胞生长均无抑制作用,细胞活力正常.与LPS组比较,温通活血乳膏组能显著抑制NO、ROS产生及TNF-α、IL-6水平(P＜0.05,P＜0.01),并均呈量效关系;也能显著抑制LDH释放(P＜0.05),但量效关系不明显.RAW264.7细胞经LPS刺激后,p65、p-p65、IKK、p-IKK细胞核区可见明显的绿色荧光表达,与细胞核蓝色叠加,其核内荧光强度显著高于正常对照组(P＜0.01);经温通活血乳膏干预后,p65蛋白荧光强度显著降低(P＜0.01).结论 温通活血乳膏能有效抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞释放炎症因子,具有一定抗炎作用,其机制可能与抑制p65蛋白核转位有关.
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牛耳枫提取物的抗炎作用
目的 研究牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth提取物的体内外抗炎作用及其作用机制.方法 以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型和小鼠内毒素血症模型观察牛耳枫提取物对NO、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素IL-1β及IL-1O水平的影响.MTT法检测牛耳枫提取物对RAW264.7巨噬细胞的毒性.50只雌性BALB/c小鼠灌胃牛耳枫提取物,14 d后小鼠腹腔注射LPS,用Griess和ELISA试剂盒对血清中NO、TNF-α、IL-1β及IL-10水平进行测定,免疫组化法研究小鼠肝脏中NO和TNF-α蛋白的表达.结果 牛耳枫提取物可显著抑制NO、TNF-α、IL-1β及IL-10的释放,免疫组化结果显示提取物可抑制一氧化氮合成酶(iNOS)和TNF-α蛋白的表达.结论 牛耳枫提取物抗炎作用显著,其机制可能与减少炎症因子的释放有关.
关键词： 牛耳枫 抗炎 脂多糖 RAW264.7巨噬细胞 内毒素血症 -
紫堇灵的分离制备及抗炎活性
旨在从苦地丁药材中分离出紫堇灵,从TLRs/NF-κB信号传导通路角度探讨其抗炎作用机制.以80％乙醇提取、硅胶柱色谱等方法制备紫堇灵,UPLC、MS、1H NMR、13C NMR等方法进行纯度及结构鉴定;利用MTT实验评价紫堇灵的细胞毒性;采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,用紫堇灵进行干预,以Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞中TLR4、TLR2、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平;进而通过实时荧光定量PCR、Western blot技术分别检测p65 mRNA及细胞核p65表达情况.实验发现,在LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型中,5～40 μmol/L紫堇灵呈正相关下调RAW264.7细胞中TLR4、TLR2蛋白的表达水平,抑制IκBα磷酸化并从基因水平和蛋白水平抑制p65转位入核.结果表明,紫堇灵可能是通过TLRs/NF-κB信号通路发挥对LPS致RAW264.7细胞炎症的抑制作用.
关键词： 紫堇灵 脂多糖 RAW264.7巨噬细胞 抗炎机制 -
木犀草素对活化的 RAW 264．7巨噬细胞分泌炎症因子的影响
目的：炎症是机体的一种防御性反应，但过度的炎症又会导致机体损伤。文中旨在探讨木犀草素对LPS和IFN-γ诱导的RAW264．7细胞炎症因子表达的影响及机制。方法将细胞分为对照组、LPS＋IFN-γ组、木犀草素低、中、高剂量组。对照组：不加药的RAW264．7细胞；LPS＋IFN-γ组：终浓度为10 ng／mL LPS＋20 ng／mL IFN-γ刺激细胞M1极化；木犀草素低剂量组：LPS＋IFN-γ与终浓度为5μmol／L的木犀草素同时刺激；木犀草素中剂量组：LPS＋IFN-γ与10μmol／L的木犀草素共同刺激；木犀草素高剂量组：LPS＋IFN-γ与20μmol／L的木犀草素共同刺激。激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化；Real time-qPCR检测诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）、IL-1β和IL-6基因的表达，ELISA检测上清TNF-α和IL-6的分泌，Western blot检测蛋白通路phospho-STAT3（ser727）（p-STAT3）的变化。结果活化的RAW264．7细胞形态发生明显变化，与对照组比较，其余4组iNOS、IL-1β、IL-6均降低（P＜0．05）；与LPS＋IFN-γ组iNOS（98．91±10．65）比较，木犀草素高剂量组（29．52±3．07）明显降低（P＜0．01）；与LPS＋IFN-γ组IL-1β（110．69±4．12）比较，木犀草素中剂量组、木犀草素高剂量组（78．38±8．65、41．59±6．80）明显降低（P＜0．05），与LPS＋IFN-γ组IL-6（394．10±33．47）比较，木犀草素低、中、高剂量组（177．51±19．28、106．14±5．63、27．15±1．26）明显降低（P＜0．05）。 LPS＋IFN-γ能诱导RAW264．7细胞M1表型的p-STAT3（ser727）上调，与对照组比较，M1、木犀草素低、中剂量组p-STAT3明显升高（ P＜0．05），与LPS＋IFN-γ组比较，木犀草素低、中、高剂量组M1源性的p-STAT3-ser表达下调（P＜0．05），并呈剂量依赖性。与对照组比较，M1、木犀草素低、中剂量组IL-6、TNF-α表达明显升高（P＜0．05），与LPS＋IFN-γ组比较，木犀草素低、中、高剂量组IL-6、TNF-α表达明显下调（ P＜0．05）。其中IL-6呈浓度依赖性，TNF-α不呈浓度依赖性。结论木犀草素可能通过下调p-STAT3抑制RAW264．7细胞致炎因子的表达，从而发挥抗炎作用。
关键词： 木犀草素 RAW264.7巨噬细胞 炎症因子 STAT3 -
AcSDKP体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究
目的 探讨N-乙酰-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能的影响.方法 取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖(LPS)组和LPS加不同浓度的AcSDKP(1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L)处理组.采用荧光定量PCR法检测细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞素(IL)-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA相对水平;使用Transwell小室检测RAW264.7细胞的趋化能力;采用Western blot法检测细胞iNOS、磷酸化的蛋白激酶复合体抑制物(p-IKK)、磷酸化的κB抑制蛋白(p-IκB)和磷酸化的P65(p-P65)蛋白表达水平.结果 LPS处理组TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于对照组[分别高出(41±2.1)倍、(1073±80.8)倍和(1726±110.2)倍,P<0.01];AcSDKP(10 nmol/L和100 nmol/L)处理组TNF-α水平显著低于LPS处理组[分别降低19.0%和39.3%,P<0.01];AcSDKP(1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L)处理组IL-1β水平显著低于LPS处理组[分别降低22.08%、35.8%和38.2%,P<0.01];AcSDKP(1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L)处理组IL-6水平显著低于LPS处理组[分别降低15.8%、35.7%和43.3%,P<0.01];LPS处理组穿过小室的细胞数为(136±5.3)个/HP,显著高于对照组[(64±5.3)个/HP,P<0.01],而AcSDKP处理组穿过小室的细胞数[分别为(105±4.8)、(85.3±5.0)和(73.7±5.6)个/HP],显著低于LPS组[(136±5.3)个/HP,P<0.05];LPS处理组iNOS mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组[分别为(21±2.5)倍和(5.9±0.4)倍,P<0.01],而AcSDKP处理组iNOS mRNA显著低于LPS处理组[分别降低37.8%、23.3%和33.1%,P<0.05];在10 nmol/L和100 nmol/L浓度AcSDKP处理组,两种蛋白水平显著低于LPS处理组[分别降低27.0%和40.2%,P<0.05];LPS处理组p-IKK、p-IκB和p-P65表达量均显著高于对照组[分别为(25.9±4.8)倍、(9.5±0.6)倍和(2.1±0.2)倍,P<0.01],而AcSDKP(10 nmol/L)处理组三者水平较LPS处理组显著下降[分别为42.5%、17.8%和29.7%,P<0.05].结论 AcSDKP可抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,这一效应可能与阻断IKK/IκB/NF-κB通路有关.
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水合氯醛诱发RAW264.7巨噬细胞凋亡及其机制
目的:探讨水合氯醛处理对RAW264.7巨噬细胞凋亡的影响及其机制.方法:以不同浓度的水合氯醛对RAW264.7巨噬细胞处理不同时间,采用形态学观察、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂、Hochest33258染色和DNAladder试剂检测RAW264.7巨噬细胞的凋亡情况,并检测Fas/FasL表达情况.结果:水合氯醛处理后RAW264.7巨噬细胞形态由梭形变圆直至脱落悬浮;Annexin V-FITC/PI双染检测显示水合氯醛处理可诱导RAW264.7巨噬细胞从早期向晚期凋亡,Hochest33258染色和DNA ladder检测均显示诱导凋亡;同时高表达Fas,但不表达FasL.结论:水合氯醛可通过Fas/FasL途径诱导RAW264.7巨噬细胞细胞凋亡.
关键词： 水合氯醛 RAW264.7巨噬细胞 凋亡 Fas/FasL -
结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6m RNA表达的影响
目的 研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应.方法 利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.col BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂金对重组蛋白进行纯化并复性.利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析.分别用浓度为100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24 h、48 h、72 h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA的表达量的变化.结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50 kDa.经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2％,并成功的进行了蛋白复性.浓度分别为100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24 h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF α mRNA的表达没有影响(P＞0.05),而IL-6 mRNA的表达上调(P＜0.05)；48 h、72 h后NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA的表达显著上调(P＜0.05).结论 成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应.
关键词： 结核分枝杆菌 ppe37蛋白 RAW264.7巨噬细胞
