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牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析
目的:研究牛耳枫水提物的化学成分及其抗胆碱脂酶活性.方法:采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,MCI柱色谱和制备液相色谱等方法对牛耳枫的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质、核磁共振谱法、质谱法以及参考相关文献鉴定化合物结构;采用UPLC-MS/MS方法测定化合物的抗乙酰胆碱酯酶(AChE)及丁酰胆碱酯酶(BChE)活性.结果:从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离得到7个化合物,分别鉴定为5-oxymaltol(1),secodaphniphylline (2),2,6-dimethyl-3-hydroxychromone (3),deoxycalyciphylline B(4),calyciphylline A(5),daphnezzomine M(6),deoxyisocalyciphylline B (7).其中化合物4和7具有抗AChE活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(128.83 ±21.41) μmol·L-1和(56.15±11.02) μmol·L-1;化合物2,4,5和7具有抗BChE酶活性,IC50分别为(0.31±0.15),(54.53±3.33),(811.17 ±22.49) μmol·L-1和(8.13±0.78) μmol·L-1.结论:化合物1和3为首次从该植物中分离获得,化合物2和化合物7具有较强的抗BChE活性,具有开发为胆碱酯酶抑制剂的潜力.
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牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制
目的 探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制.方法 F21 6.25～100 mg·L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50.F21 10 ～ 100 mg·L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡.F2110,30 mg·L-1+ Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20 μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率.结果F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3+0.1和(0.13 +0.1)mg·L-1,且具有量效(F=232.39,P＜0.05)和时效(F=65.59,P＜0.05)关系.F21 10 ～30 mg·L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失.琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带.流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg·L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)％,(25.45 +0.01)％和(43.67±0.03)％(P＜0.05).Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡.F21 10和30 mg·L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)％和(42.77±0.01)％,而F21 10,30 mg· L-1+ Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)％和(44.01±0.01)％,与相应的F21组相比无统计学差异.结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡.
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识别真假鸦胆子
鸦胆子又名鸦蛋子、老鸦胆，为苦木科植物鸦胆子成熟干燥的果实，每年秋季果实成熟时采收，除净枝叶杂质，晒干即可入药。如果实尚未成熟，采收过早，晒干的鸦胆子多呈黄绿色。其性寒，味苦，有毒，具有清热、燥湿、杀虫、解毒的功效，用于治疗痢疾、久泻、疟疾、痔疮、疔毒、赘疣、鸡眼等症。《医学衷中参西录》载：“鸦胆子，性善，凉血止血，兼能化瘀生新。凡痢之偏于热者用之皆有捷效，而以治下鲜血之痢，泻血水之痢，则尤效。又善清胃腑之热，胃有实热充塞，噤口不食者，服之即可进食。审斯，则鸦胆子不但善利下焦，即上焦有虚热者，用之亦妙，此所以治噤口痢而有捷效也。”市场上有以交让木科植物牛耳枫的果实冒充鸦胆子，使用时注意鉴别。
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枫蓼肠胃康片质量标准的研究
目的 建立枫蓼肠胃康片(牛耳枫和辣蓼)的质量标准.方法 TLC法鉴定牛耳枫和辣蓼,HPLC法同时测定芦丁和原儿茶酸的含有量.结果 TLC斑点清晰,阴性无干扰.芦丁和原儿茶酸分别在4～128 μg/mL(r=0.999 7)和2～64 μg/mL(r=0.999 5)范围内线性关系良好,平均回收率分别为101.6％ (RSD =2.1％)和98.7％ (RSD=2.0％).结论 该方法简便准确,重复性好,适用于枫蓼肠胃康片的质量控制.
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牛耳枫提取物的抗炎作用
目的 研究牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth提取物的体内外抗炎作用及其作用机制.方法 以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型和小鼠内毒素血症模型观察牛耳枫提取物对NO、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素IL-1β及IL-1O水平的影响.MTT法检测牛耳枫提取物对RAW264.7巨噬细胞的毒性.50只雌性BALB/c小鼠灌胃牛耳枫提取物,14 d后小鼠腹腔注射LPS,用Griess和ELISA试剂盒对血清中NO、TNF-α、IL-1β及IL-10水平进行测定,免疫组化法研究小鼠肝脏中NO和TNF-α蛋白的表达.结果 牛耳枫提取物可显著抑制NO、TNF-α、IL-1β及IL-10的释放,免疫组化结果显示提取物可抑制一氧化氮合成酶(iNOS)和TNF-α蛋白的表达.结论 牛耳枫提取物抗炎作用显著,其机制可能与减少炎症因子的释放有关.
关键词： 牛耳枫 抗炎 脂多糖 RAW264.7巨噬细胞 内毒素血症 -
牛耳枫与辣蓼提取物药效学研究
目的 研究牛耳枫与辣蓼提取物的抗急性胃肠炎的作用.方法 采用冰醋酸致小鼠毛细血管通透性法、热板法、豚鼠回肠平滑肌运动法和95%乙醇致大鼠胃溃疡法来观察提取物的抗炎、镇痛、解痉和抗胃溃疡作用.结果 牛耳枫与辣蓼提取物对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著抑制作用(P<0.01),而无镇痛作用,对BaC12引起的肠痉挛有明显的解痉作用(P<0.001),对乙酰胆碱引起的肠痉挛无解痉作用,同时具有减小95%乙醇对犬鼠胃粘膜损伤的作用.结论 牛耳枫与辣蓼提取物具有很好的抗炎、解痉及抗乙醇引起的胃粘膜损伤作用,对胃肠道有很好的保护作用.
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牛耳枫的高效液相色谱指纹图谱研究
目的:采用HPLC法对广西荔浦地区的牛耳枫药材进行指纹图谱研究.方法:利用Agilent HP 1260,测定同一地区的12批牛耳枫药材.Waters XBridgeTM C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长254 nm.结果:建立了广西荔浦地区的牛耳枫药材的HPLC指纹图谱,标定了11个共有峰,指认了2个峰,各指纹图谱的相似度均达到0.85以上;利用系统聚类分析,将同一地区的牛耳枫分为3类;利用主成分分析,确定3个主成分,累计贡献率为81.980％;以两个主成分作二维散点图,将不同批次的牛耳枫分为3大类.结论:运用这3种统计分析方法均能够较好的对指纹图谱进行识别,为牛耳枫的鉴别、质量控制等提供了新的科学依据.
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高效液相色谱法测定牛耳枫中芦丁的含量
目的 建立HPLC法测定牛耳枫中芦丁的含量.方法 采用Scienhome Puritex C18(200×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-36%醋酸-水(22:10:2.6:65.4),流速为1.0ml·min-1,检测波长:356nm,柱温为25℃.结果 芦丁在5.8μg·ml-1～232μg·ml-1范围内具有良好的线性关系,其回归方程为:Y=31 600X-74 683,r=0.9998.平均加样回收率为100.9%,RSD=1.97%.结论 本方法操作简单,分离效果好,回收率高,可用于牛耳枫中芦丁的含量测定.
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黎族常用药牛耳枫生药学研究
目的:对牛耳枫药材进行系统地生药学研究.方法:采用性状鉴别、显微鉴别及理化鉴别的方法对牛耳枫药材的植物形态、药材性状、显微特征及薄层色谱等方面进行研究.结果:牛耳枫茎横切面主要由木栓层、皮层、韧皮部及木质部等组成;薄层色谱斑点清晰,重现性好.结论:本方法简便易行,可为生药牛耳枫的鉴别、质量研究及进一步开发应用提供科学依据.
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牛耳枫药材中总黄酮含量测定
目的 建立测定牛耳枫药材中总黄酮的含量方法.方法 以芦丁为对照,显色后采用分光光度法于510nm处测定总黄酮含量.结果 总黄酮在7.84～47.04 μg/ml (r＝0.9998)范围内线性关系良好；总黄酮的平均回收率为98.51％,RSD＝2.48％.结论 建立的方法可用于牛耳枫总黄酮的测定.
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黎药材海南牛耳枫大鼠体内药动学研究
目的 研究大鼠灌胃给药海南牛耳枫提取物后槲皮素在大鼠体内的药物动力学特征.方法 采用LC-MS/MS法,测定灌胃给药后大鼠血浆中槲皮素的浓度变化,用DAS2.0药动学软件处理,计算药动学参数.结果 大鼠灌胃给药海南牛耳枫提取物后槲皮素在大鼠体内动力学参数为Tmax=(0.195±0.155) h,Cmax= (35.00±15.30) ng/ml,AUC0-t=(66.82±21.77) ng/(ml·h),t1/2=(5.736±2.513 ) h .结论 该法选择性强、灵敏度高,适用于药材及制剂中槲皮素的体内药动学研究.
关键词： 牛耳枫 槲皮素 LC-MS/MSV药动学 -
HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量
目的:采用高效液相色谱法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量.方法:采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4％甲酸(16∶ 84)为流动相,流速1.0ml·min-1,检测波长346nm,柱温:35℃,检测牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷含量.结果:山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92 ～69.2μg ·ml-1(r=0.9997),平均回收率(n=6)为98.69％.结论:HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量准确性高,可用于牛耳枫的质量标准控制.
关键词： 山奈酚-3-O-芸香糖苷 高效液相色谱法 牛耳枫 -
HPLC法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量
目的 采用高效液相色谱法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量.方法 采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4％甲酸(16∶84)为流动相,流速1.0mL· min-1,检测波长346nm,柱温:35℃.结果 山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92～69.2μg· mL-1(r =0.9997),平均回收率(n=6)为98.69％.结论 本法可测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量,可用于该产品的质量控制.
关键词： 山奈酚-3-O-芸香糖苷 枫蓼肠胃康片 牛耳枫 高效液相色谱法 含量 -
牛耳枫的生药学研究
目的:研究民族药牛耳枫的生药鉴定特征,以完善其质量标准.方法:应用植物分类学、性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别的方法对牛耳枫进行研究.结果:对牛耳枫的生药学鉴定特征进行了详细观察和描述,并认为果实具宿萼,表面被白粉;叶上、下表皮均具含晶细胞,且叶下表面多见乳头状突起,是牛耳枫药材的主要鉴别特征.薄层色谱斑点清晰,重现性好.结论:研究结果可为牛耳枫的鉴别及质量标准提高提供参考.
