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牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析
目的:研究牛耳枫水提物的化学成分及其抗胆碱脂酶活性.方法:采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,MCI柱色谱和制备液相色谱等方法对牛耳枫的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质、核磁共振谱法、质谱法以及参考相关文献鉴定化合物结构;采用UPLC-MS/MS方法测定化合物的抗乙酰胆碱酯酶(AChE)及丁酰胆碱酯酶(BChE)活性.结果:从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离得到7个化合物,分别鉴定为5-oxymaltol(1),secodaphniphylline (2),2,6-dimethyl-3-hydroxychromone (3),deoxycalyciphylline B(4),calyciphylline A(5),daphnezzomine M(6),deoxyisocalyciphylline B (7).其中化合物4和7具有抗AChE活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(128.83 ±21.41) μmol·L-1和(56.15±11.02) μmol·L-1;化合物2,4,5和7具有抗BChE酶活性,IC50分别为(0.31±0.15),(54.53±3.33),(811.17 ±22.49) μmol·L-1和(8.13±0.78) μmol·L-1.结论:化合物1和3为首次从该植物中分离获得,化合物2和化合物7具有较强的抗BChE活性,具有开发为胆碱酯酶抑制剂的潜力.
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山茱萸环烯醚萜苷在体外对胆碱酯酶活性的影响
该研究的目的是观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)在体外试验中对胆碱酯酶的作用,以探讨该药在治疗阿尔茨海默病(AD)中的作用机制.使用人红细胞、大鼠全脑匀浆和人血浆作为酶源,采用生物化学方法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)的活性,检测CIG对胆碱酯酶的影响.结果显示,CIG对人红细胞及大鼠全脑匀浆AChE活性具有抑制作用,50％抑制率(IC50)分别为1.6,3.3g·L-1,并且CIG对AChE的抑制是可逆的.CIG对人血浆BuChE也具有抑制作用,IC502.9 g·L-1.实验结果表明,CIG在体外试验中对AChE和BuChE具有一定的抑制作用,这可能为GIG治疗AD的作用机制之一.
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血清丁酰胆碱酯酶与白蛋白在肝硬化Child-Pugh分级中的价值比较
目的对肝硬化患者血清丁酰胆碱酯酶活性水平和血清白蛋白浓度同时进行检测,研究二者在肝硬化Child-Pugh分级中的相互关系及临床价值.方法血清丁酰胆碱酯酶(BuChE)以酶速率比色法,白蛋白(Alb)以溴甲酚绿法在全动自动生化分析仪上测定.结果肝硬化患者在严格按照Child-Pugh分级标准划分而成的A、B、C三级中,各级血清BuChE活性均明显下降,且结果差异有显著意义(F=43.54,P<0.001).各级中下降程度依次为Child-A
关键词： 丁酰胆碱酯酶 血清白蛋白 肝硬化 Child-Pugh分级 -
不同复方药剂对沙林染毒兔的救治研究
目的 探讨不同抗胆碱能化合物联合氯解磷定对沙林染毒兔的救治效果,为药物联合应用的合理救治方案提供依据.方法 通过测定几种抗胆碱能化合物与氯解磷定单独或者联合应用对沙林染毒兔的防护比率,并结合动物救治过程中体内乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BChE)活性恢复情况,确定疗效较好的可与氯解磷定联合应用的抗胆碱能化合物.结果 阿托品、盐酸戊乙奎醚、氯解磷定单独应用时对中毒兔的防护比率均小于1.20;不同种类抗胆碱能药物与氯解磷定联合应用时,3种盐酸戊乙奎醚联合其他药物的防护比率均较2种阿托品联合其他药物的防护比率高,前者对动物的防护比率为3.68～3.80,后者对动物的防护比率为2.30～2.56.采用盐酸戊乙奎醚和贝那替秦与氯解磷定联合应用对沙林重度染毒兔的疗效为77.8%.结论 采用盐酸戊乙奎醚和贝那替秦与氯解磷定联合应用对沙林染毒兔有较好的救治效果.
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美国神经性毒剂救治研究进展
神经性毒剂除了在早期抑制乙酰胆碱酯酶（ AChE）外，也导致长期的进行性神经炎和迟发神经退行性病变。近年来，美国国立卫生研究院资助了多项神经性毒剂中毒机制和治疗药物的研究，旨在快速高效对抗神经性毒剂急性中毒及远后效应。正在研制的治疗药物主要包括AChE靶向药物、广谱重活化剂和生物清除剂、抗炎及神经保护药。
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丁酰胆碱酯酶基因-壳聚糖纳米粒初步研究
目的优化抗毒酶基因纳米粒制备工艺,并对纳米粒部分性质进行研究.方法用复凝聚法制备抗毒酶基因纳米粒,采用规 格化的正交表安排试验,用SAS统计软件处理数据;用透射电镜观测纳米粒粒径和形态;用P cs测定粒径和Zeta电位;用体外转染试验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置显微镜观察转染结果.结果正交设计试验结果表明,优化的抗毒酶基因纳米粒 制备条件是:壳聚糖浓度300μg·ml-1,丁酰胆碱酯酶基因质粒浓度100μg·ml -1,硫酸钠浓度8mmol·L-1,pH值5.5,涡旋混合时间30s.所制备的纳米粒在透射 电镜下观察,结果表明:绝大多数粒子的粒径在100nm以下,粒径分布比较均匀.Pcs测定结 果表明:98%以上的粒子粒径分布在50～100nm范围,与透射电镜结果相符;平均Zeta电位为 15.9±6.3mV.体外基因转染试验表明:纳米粒能将所包裹的基因递送到细胞内,并表达目标蛋白-丁酰胆碱酯酶.结论壳聚糖浓度、质粒基因浓度以及它 们之间的交互作用,在制备条件选择中具有决定性作用,丁酰胆碱酯酶基因-壳聚糖纳米粒 制备工艺可行,递送基因能力较强.本研究结果表明:壳聚糖纳米粒作为基因递送载体具有广阔的发展空间.
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胆碱酯酶抑制剂他克林-单甲氧芳基杂合物的设计、合成及活性评价
本文设计合成了一系列他克林-单甲氧芳基杂合物(5a～51)作为胆碱酯酶抑制剂,并对其进行了活性评价.结果表明该类化合物比他克林具有更好的胆碱酯酶抑制活性,IC50值均达到纳摩尔级,其中化合物5h对乙酰胆碱酯酶的抑制活性强,IC50值为6.74 nmol·L-1,5f对丁酰胆碱酯酶的活性强,IC50值为3.83 nmol·L-1.酶动力学及分子对接表明该类杂合物能够同时作用于AChE的催化活性位点和外周结合位点.
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丁酰胆碱酯酶抑制剂的高通量筛选
目的:建立丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinesterase,BuChE)活性的高通量检测方法,用以筛选BuChE抑制剂及乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)和BuChE的双重抑制剂.方法:人血浆以0.05μmol·L-1PBS稀释作为BuChE反应液,采用DTNB法检测BuChE活性.化合物样品与酶反应液预孵30min,加入底物氯化丁酰巯基胆碱(BuSch)和显色剂5,5'一二硫双硝基苯甲酸(DTNB),室温孵育60 min后,于412 nm检测吸收度.结果:通过对反应体系的优化,建立了可靠的筛选模型,并对76 730个样品进行筛选,得到22个具有良好量效关系的活性化合物,命中率0.029%.结论:建立了操作简单、反应灵敏、结果稳定的适用于高通量筛选的BuChE抑制剂体外筛选模型,并发现了一些具有较好活性的化合物.
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异黄酮衍生物J39136对东莨菪碱致学习记忆障碍模型小鼠的影响
目的:本文旨在初步探讨具有乙、丁酰胆碱酯酶抑制活性的异黄酮衍生物J39136对小鼠东莨菪碱导致的学习记忆障碍的影响,为该化合物后续研究提供实验依据.方法:采用Morris水迷宫、跳台和避暗3个行为学实验,评价J39136不同剂量对小鼠认知和记忆的作用.结果:化合物J39136各给药组均有减少小鼠在避暗试验中的错误次数的趋势;J39136各剂量组均可显著延长小鼠的跳台潜伏期,减少小鼠的跳台错误次数,缩短小鼠在Morris水迷宫实验中的游泳潜伏期,具有一定的剂量依赖性.结论:化合物J39136能够改善东莨菪碱致学习记忆障碍,值得进行深入开发.
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基因工程人丁酰胆碱酯酶的纯化及其在体外对琥珀酰胆碱的解毒作用
目的开发丰富又安全的人丁酰胆碱酯酶来源,并检测其解毒效率.方法家蚕血淋巴液中重组人丁酰胆碱酯酶(rhBChE)的纯化采用批量硫酸铵分段分离和普鲁卡因酰胺-脂糖凝胶4B亲和层析技术.结果聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的rhBChE从血淋巴液中的总收率为66%,酶比活性达715 mmol*min-1*g-1蛋白.rhBChE在-20℃含20%甘油及0.02% NaN3的10 mmol*L-1磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中存放1年,酶活性无明显变化.18只小鼠ip事先与rhBChE孵温的1.5 LD的琥珀酰胆碱, 不出现任何中毒症状和体征,全部存活;而琥珀酰胆碱对照组,18只小鼠均剧烈抽搐并在2～5 min内窒息死亡.结论实验结果说明,从感染家蚕幼虫血淋巴液中纯化rhBChE的方法可靠,基因工程rhBChE在琥珀酰胆碱中毒危象的治疗中有潜在应用前景.
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血清叶酸水平与肝硬化的相关性分析
目的:检测肝硬化患者血清叶酸水平,观察血清叶酸水平与肝硬化的相关性,探讨叶酸在肝硬化诊断中的价值.方法:采用免疫化学发光法对59例肝硬化患者、42例非肝硬化患者及50例健康体检者的血清叶酸水平进行检测.结果:肝硬化患者血清叶酸水平显著低于非肝硬化患者和健康体检者,均有统计学意义(分别为P＜0.05.P＜0.01),肝硬化伴腹腔积液患者叶酸水平更低,且与肝硬化伴腹腔积液患者叶酸水平比较有显著性差异(P＜0.01).与清蛋白、丁酰胆碱酯酶、凝血酶原活动度等反映肝组织病理损伤程度和肝纤维化进程指标具有良好正相关性(相关系数r分别为0.768 1,0.892 3,0.821 0).结论:肝硬化患者FA水平显著降低,与肝纤维化的病理进程密切相关.血清FA水平检测将成为有价值的肝硬化诊断指标,对肝硬化的发生、发展及疗效和预后具有十分重要的临床意义.
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丁酰胆碱酯酶基因K变异与老年非心脏手术术后谵妄的相关性研究
目的 探讨丁酰胆碱酯酶(butyrocholinesterase,BChE)基因K变异与老年非心脏手术术后谵妄的关系.方法 采用连续入组方法,将2014年1月至2016年12月山东省立医院100例老年非心脏手术术后谵妄患者纳入谵妄组,108例非谵妄患者纳入非谵妄组,检测两组患者血清BChE活性,采用聚合酶链反应及直接测序法测定BCHE基因K变异基因型,并分析BChE不同基因型与BChE活性的相关性.结果 谵妄组患者BChE活性明显低于非谵妄组(P<0.05),两组BChE基因型及等位基因分布无显著差异(P>0.05).不同基因型BChE活性组内比较差异无显著性(P>0.05).结论 BCHE基因K变异与老年非心脏手术术后谵妄无明显相关性.
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十溴联苯醚(PBDE-209)暴露对小鼠学习记忆能力的影响
目的 探讨十溴联苯醚(PBDE-209)暴露对小鼠学习记忆能力的影响,为防治PBDE-209危害提供依据.方法 18只雌性BALB/c小鼠随机分成3组,每组6只,分别给予PBDE-209(1500mg·kg~(-1)·d~(-1))+精炼花生油(高剂量组)、PBDE-209(300mg·k~(-1)·d~(-1))+精炼花生油(低剂量组)和0.1 ml/10 g体重花生油(对照组)灌胃.每日1次,连续染毒4周后做Morris水迷宫试验、穿梭箱试验(期间仍然给药),测定小鼠的学习记忆能力,待染毒5周后处死.测定体重、脏器重量、脑组织中乙酰胆碱酯酶活力和丁酰胆碱酯酶活力,观察肝脏细胞组织形态学变化.结果 高剂量组心脏系数明显高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05).Morris水迷宫试验结果显示,各组动物逃避潜伏期均有不同程度缩短,变化趋势差异有统计学意义(F=3.134,P<0.05);低剂量染毒组在第2象限游泳时间为(15.78±10.92)s,明显短于对照组[(28.80±8.67)s],差异有统计学意义(P<0.05).穿梭箱试验显示,各组主动逃避次数差异无统计学意义(F=3.423,P=0.06).与对照组比较,各染毒组脑组织乙酰胆碱酯酶活力和丁酰胆碱酯酶活力的差异无统计学意义(P>0.05).染毒组肝脏出现脂肪变性和肿胀,高剂量组尤为明显.结论 4周龄BALB/c小鼠暴露于PBDE-209在一定程度上可影响小鼠空间学习记忆能力.
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大鼠海马中氟浓度与胆碱酯酶活力的关系
目的研究氟在大鼠海马中的蓄积及其对胆碱酯酶活力的影响.方法用氟化钠对大鼠进行亚慢性染毒,测定大鼠海马中氟浓度及胆碱酯酶活力.结果大鼠海马内氟浓度与接触剂量呈正相关,高剂量组、低剂量组[(13.03±1.79)、(9.83±0.92)μg/g]与对照组[(8.27±1.11)μg/g]比较或两剂量组间比较,差异均有显著性(P＜0.01);乙酰胆碱酯酶(AChE)活力高剂量组、低剂量组分别为(0.111±0.031)、(0.143±0.025)μmol/mg,与对照组(0.183±0.027)μmol/mg比较或两剂量组间比较,差异均有显著性(P＜0.01),且与海马内氟浓度呈负相关(r=-0.700,P＜0.01);丁酰胆碱酯酶(TChE)活力在高剂量组[(0.041±0.010)μmol/mg]与对照组[(0.067±0.025)μmol/mg]间比较,差异有显著性(P＜0.05),与海马内氟浓度的负相关关系不明显(r=-0.317,P=0.094).结论氟可透过血-脑屏障在大鼠海马内蓄积,进而抑制胆碱酯酶活力.
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丁酰胆碱酯酶对急性有机磷农药中毒的诊断意义
目的 观察血浆丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性在急性有机磷农药中毒(AOPP)诊断中的意义,分析乙酰胆碱酯酶(ACHE)和BuChE的相关性,并对BuChE的临床价值进行评估.方法 以26例健康志愿者的AChE和BuChE活性作为正常参考值.选择2009年4月至9月21例不同种类AOPP患者,在病情发展过程中以改良的Ellman比色法分别测定全血AChE和血浆BuChE活性,计算两者的活性,并进行验证.回顾性分析2008年1月至2009年4月113例AOPP患者的BuChE活性与临床病情发展的关系.结果 AChE、BuChE的正常参考值分别为(105±33)U/Hb、(15 807±3 495)U/L.有机磷农药对AChE和BuChE活性的抑制程度并不相同,当患者AChE活性小于50%、30%或20%时,对应BuChE活性分别为小于20%、10%或5%;AChE和BuChE活性随时间变化的趋势相近,且与病情发展相符.动态监测显示BuChE活性下滑或持续抑制在5%以下时,体内农药浓度较高;BuChE的回升预示病情好转.结论 BuChE可用于AOPP的诊断及病情判断,但不能套用现有AChE标准.使用BuChE作为判断指标时需结合农药种类综合考虑,中、重度中毒的分级标准可划定为正常BuChE活性的20%、10%.
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丁酰胆碱酯酶在阿尔茨海默病发病机制中的作用
阿尔茨海默病是一种病因和发病机制尚未明确的神经变性病,其典型病理改变为β-淀粉样蛋白沉积形成的神经炎性斑(亦称老年斑)和tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结,常累及胆碱能系统,其中丁酰胆碱酯酶在阿尔茨海默病发病与进展过程中发挥重要作用.本文就丁酰胆碱酯酶在阿尔茨海默病发病机制中的作用进行简要综述.
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血管性痴呆患者丁酰胆碱酯酶活性及与脑白质病变的相关性研究
目的 探讨血管性痴呆(VaD)患者血清丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性与认知功能、执行功能及脑白质病变的关系.方法 纳入2009年1月-2012年1月于我院神经内科住院及门诊就诊的25例VaD患者(VaD组)及我院同期体检的健康老年人20例(对照组).对所有受检者检测血BuChE含量,应用简易精神状态检查量表(MMSE)、画钟试验(CDT)、积木试验(BDT)检测认知及执行功能,采用年龄相关白质改变的评分方法(ARWMCrs)评价脑白质病变程度,并分析相关性.结果 VaD患者血BuChE含量高于对照组[(7 429±853)U/L比(5 283±965)U/L ],差异有统计学意义(P＜0.05);MMSE[(16.46±3.52)分比(26.35±3.74)分]、CDT[(1.53±0.84)分比(3.65±0.52)分]、BDT[(14.88±7.29)分比(38.47±7.31)分]评分均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),而全脑[(11.38±3.63)分比(4.54±2.21)分]及额区[(2.59±0.68)分比(1.07±0.53)分]ARWMCrs评分高于对照组,差异亦有统计学意义(P＜0.05).VaD患者血BuChE含量与MMSE及CDT评分呈负相关(r值分别为-0.415、-0.463,P＜0.05),与额叶ARWMCrs呈正相关(r=0.428,P＜0.05).结论 VaD患者血BuChE含量增高,与认知功能、执行功能及脑白质病变相关.
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胆碱酯酶检测的临床研究进展
胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)又称为酰基胆碱水解酶,以多种同工酶形式存在于体内,按照酶水解底物的专一性、水解速度的差异、对抑制剂敏感性以及组织分布特点,将体内ChE分为两种:一种为乙酰胆碱酯酶(AChE,也称真胆碱酯酶),人AChE是膜结合蛋白质,以多种分子形式存在,主要分布于神经组织,如脑白质和灰质、神经节内的神经细胞和神经肌肉接头,还分布于红细胞和血清等非神经组织中.
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慢性有机磷农药接触对羧基酯酶活力的影响
目的酯酶不仅在有机磷农药解毒中发挥重要作用,而且与心血管疾病有密切关系.我们研究3种酯酶(丁酰胆碱酯酶BchE、羧酸酯酶CarbE和对氧磷酶PonE)的酶活力在一般人群中的特点,探讨有机磷农药慢性接触对酶活力的影响,为其他研究提供基线资料.方法选取100名无有机磷农药接触的对照人群和75名长期接触有机磷农药的生产工人,检测外周血酯酶活力,描述正常成人酶活力的特点,分析有机磷接触对酯酶活力的影响.结果对照人群BchE均值为(78.3±30.4)mmol/(ml·h); CarbE均值为(362.7±195.0)nmol/(ml·min); PonE均值为(332.6±96.2)nmol/(ml·min).3种酶活力在人群中均呈正态分布.有机磷农药接触工人BchE活力为(27.3±21.7)mmol/(ml·h); CarbE活力为(235.6±104.0)nmol/(ml·min); PonE活力为(307.8±107.0)nmol/(ml·min).结论 3种酯酶活力无年龄和性别差异.有机磷接触工人的BchE和CarbE活力与对照人群比较,差异有显著性,说明有机磷能抑制BchE和CarbE活力,而对对氧磷酶活力无抑制作用.提示,BchE和CarbE活力可以作为反映有机磷农药接触.
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上海市正常人群血清丁酰胆碱酯酶基因多态性研究
目的描述上海市正常人群血清丁酰胆碱酯酶基因型的多态分布特点,为其他研究提供基线资料.方法选取100例无有机磷接触、无急慢性肝病史和慢性消耗性疾病的正常人群,应用PCR-RFLP法确定基因型.结果丁酰胆碱酯酶K(BCHE-K)变异的3种基因型UU、UK和KK在正常人群中的频率分别为74%,25%和1%;等位基因U、K在正常人群中的频率分别为86.5%和13.5%.遗传平衡检验发现其达到Hardy-Weinberg遗传平衡.结论上海市正常人群的BCHE-K位点的多态分布与欧美人群接近.
