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不同产地不同季节苦参药材及其提取物比较研究
对不同产地苦参药材及提取物进行薄层色谱分析比较,增加了对氧化槐果碱的鉴别,同时对中国大陆地区不同产地不同季节苦参药材及提取物总生物碱分析比较.
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6种苦豆子类生物碱对炎症介质组胺的影响
目的研究6种苦豆子类生物碱对炎症介质组胺的影响,来探讨它们抗炎、免疫调节作用的机理.方法用离体实验方法研究6种苦豆子类生物碱对炎症介质组胺引起的豚鼠离体气管平滑肌和离体回肠收缩的影响.结果除氧化苦参碱和氧化槐果碱外,其余4种苦豆子生物碱对组胺引起的离体豚鼠气管平滑肌收缩均有一定的抑制作用.除氧化槐定碱外,其余5种苦豆子生物碱对炎症介质组胺引起的离体豚鼠回肠收缩有较强的舒张作用,并且作用强度均呈现良好的剂量-效应关系.结论6种苦豆子生物碱对炎症介质组胺均有不同程度的抑制作用.苦参碱、槐定碱和槐果碱的抗炎、免疫作用可能与其直接抑制炎症介质组胺与H1受体的结合有关.
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槐定碱体外抗乙肝病毒的实验研究
目的 观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞分泌HbsAg、HBeAg和Pre-S1的影响,探讨槐定碱的体外抗乙型肝炎病毒作用.方法 采用HepG 2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐定碱,作用9天后收集上清液,用MTT法观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞的抑制作用,用ELISA法检测上清液中HBsAg、HBeAg和Pre-S1的分泌,观察药物对HepG 2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,从而评价药物的抗HBV作用.结果 槐定碱对HepG 2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为6.86E-3M.在该浓度下对HBsAg和HBeAg的50%抑制浓度(IC50)分别为0.339 mmol和0.356 mmol,治疗指数分别为20.21和19.26;浓度为0.001 mmol时对Pre-S1的抑制率为62.20%.结论 :槐定碱具有一定的抗HBV作用,属低毒有效药物.
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槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响
目的:构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法:将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-62×105个细胞.细菌脂多糖(LPS,1mg·L-1)干预生长良好的IEC-6细胞12 h,建立细胞炎症模型.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3种生物碱不同浓度对炎症细胞增殖的影响;ELISA法检测给药后细胞上清中IL-6,TNF-α的变化;免疫印迹法检测细胞内IL-6及TNF-α蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组细胞上清中IL-6,TNF-α水平显著升高,LPS(1 mg·L-1)干预12 h后,IL-6,TNF-α含量分别为(1 899.68±45.80),(148.67 ±5.93) ng·L-1.苦豆碱、槐定碱和苦参碱均可有效减弱LPS诱导的结肠上皮细胞损伤.当生物碱浓度为100μmol· L-1时,槐定碱、苦参碱和苦豆碱均可提高LPS损伤细胞的活性,细胞存活率分别从80.47％提高为91.96％,92.40％,97.23％.此外,这3种生物碱可降低IL-6和TNF-α的含量及其在细胞内的表达.结论:槐定碱、苦参碱和苦豆碱3种生物碱均可通过降低IL-6和TNF-α活性发挥抗炎作用.其中,苦豆碱的抗炎作用佳.
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槐定碱对急性肺损伤小鼠肺组织 SOD,MDA 及 TLR4 表达的影响
目的:研究槐定碱对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:采用随机数字法,将60只清洁级昆明种小鼠分成6组:正常组、模型组、预防给药组、槐定碱低剂量组、槐定碱中剂量组、槐定碱高剂量组,每组10只.①正常组、②模型组、④槐定碱低剂量组、⑤槐定碱中剂量组、⑥槐定碱高剂量组:ip生理盐水0.5 mL,连续6d.③预防给药组:ip 5 mg·kg-1槐定碱,连续6d.上述②～⑥组均在末次注射生理盐水或药物后1 h ip脂多糖(LPS)9 mg· kg -1造模,造模2h后④～⑥组分别给槐定碱9,5,2.5 mg·kg-1.6h后检测肺组织匀浆中SOD活性及MDA的含量,取新鲜肺组织裂解后提取RNA,RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达水平.结果:与正常组(86.22 ±8.86) U·mg-1相比,LPS模型组(50.58±10.06) U·mg-1肺组织匀浆SOD活性明显下降；与模型组相比,各给药组SOD[预防给药组(64.71±5.74)U·mg-1,高剂量组(56.34 ±6.88) U·mg-1,中剂量组(75.50 ±13.01)U·mg-1,低剂量组(67.02±10.19)U·mg-1]均明显升高(P＜0.05)；而肺组织中MDA含量变化趋势与SOD相反(P＜0.05)；TLR4 mRNA的表达灰度值与正常组(0.45±0.20)比较,LPS模型组(0.82±0.20)明显升高；与模型组比较,各用药组[预防给药组(0.60 ±0.32)s,高剂量(0.55 ±0.19),中剂量(0.54 ±0.29),低剂量组(0.61±0.26)]均明显降低(P＜0.05).结论:槐定碱能降低ALI模型小鼠肺组织匀浆中MDA的活性,提高SOD含量,降低TLR4 mRNA的表达.
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HPLC同时测定苦豆子总碱中8种生物碱含量
目的:建立苦豆子总碱中生物碱的含量测定方法.方法:采用HPLC,乙腈-0.05 mol· L-1磷酸二氢钾(三乙胺调pH ＞6.45),梯度洗脱,柱温35℃,检测波长205 nm,流速1.0 mL·min-1.结果:8种生物碱分离良好,8种生物碱含量＞50％.结论:该方法简便,可以作为苦豆子总碱的含量测定方法,比原标准中的滴定法测定总碱含量更方便、精确.
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主动载药法制备槐定碱脂质体
目的:考察槐定碱脂质体不同制备方法对其包封率的影响.方法:采用注入、薄膜分散、逆向蒸发等被动载药法和硫酸铵梯度、pH梯度结合逆向等主动载药法制备槐定碱脂质体,用高速冷冻离心-HPLC法测定脂质体包封率.结果:被动载药法制备的脂质体包封率较低,主动载药法中pH梯度结合逆向法制备脂质体包封率为93.27%.结论:采用主动载药法可制得包封率较高的槐定碱脂质体.
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苦豆子总碱瓜尔胶水凝胶骨架片体外释放行为的研究
目的:制备苦豆子总碱结肠定位水凝胶骨架片.方法:以瓜尔胶为骨架材料,采用湿法制粒压片法,通过片在模拟胃液、小肠液、结肠液中的体外释放度评价不同比例瓜尔胶配方对槐定碱的释放影响.结果:骨架片配方A,B,C,D,E所制的颗粒色泽均匀一致,有较好的流动性.苦豆子总碱定位释放片在模拟胃液、小肠液、结肠液中的释放结果表明,瓜尔胶骨架片在6 h内槐定碱释放为13.5%～25.6%,在结肠液中初6 h释放明显加快,达55.4%～75.1%,至24 h或26 h完全释放.为进一步延缓其初6 h内释放,作者在配方C的基础上直压瓜尔胶阻止层100 mg制备双层片,体外释放表明双层片在胃液中不释放,在小肠液中释放仅为6.78%,24 h内完全释放,显示了较好的定位释放特性.采用Higuichi方程、一级方程、零级方程模型拟合,配方A,B,C,D,E接近Higuichi释药模型,一级方程模型拟合差.用Korsmeyer-Peppas equation分析其释药机制为骨架溶蚀释药.结论:苦豆子总碱水凝胶骨架片工艺合理,能够达到结肠定位释放的目的.
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槐定碱对胃癌细胞生长抑制作用的体外研究
目的 探讨苦豆子有效成分槐定碱体外对人胃癌细胞生长抑制的影响.方法 以不同浓度的苦豆子有效成分槐定碱处理低分化(MKN45)、中分化(SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株,温育48h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各浓度的苦豆子有效成分槐定碱对癌细胞的抑制率以及药物半数抑制浓度(IC50),比较苦豆子有效成分槐定碱对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用.结果 苦豆子有效成分槐定碱对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用,并且呈剂量效应,P<0.01.中分化的SGC7901细胞对槐定碱的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和低分化的MKN45细胞株.结论 苦豆子有效成分槐定碱在体外对多种胃癌细胞有不同程度的生长抑制作用,尤以对中分化的SGC7901细胞较为明显.
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生理介质中苦参碱和槐定碱的电化学动力学性质研究
目的:在生理介质中研究苦参碱和槐定碱在玻碳电极上的电化学动力学性质.方法:运用循环伏安法考察了苦参碱和槐定碱的直接电化学氧化行为,用控制电位电解库仑法、计时库仑法、计时电流法测定并计算了它们的电化学动力学参数.结果与结论:在0.30～1.2 V电位窗口内,MT和SR均产生1个不可逆氧化峰,并且它们的电极反应均受扩散步骤控制;用控制电位电解库仑法和循环伏安法得到MT和SR的电极反应电子转移数n和电荷转移系数α,运用计时库仑法和计时电流法测定了它们的扩散系数D及电极反应速率常数kf.
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HPLC测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量
目的:建立用高效液相色谱法同时测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量.方法:ALLTIMA AMINO色谱柱(4.6 mn×250mm,5 μm);流动相乙腈-3%磷酸溶液-无水乙醇(80∶10∶10);流速1.0 mL·min-1;检测波长220 nm;柱温30℃.结果:该方法回收率苦参碱为99.5%(RSD 1.58%),槐定碱为99.2%(RSD1.44%),氧化苦参碱为100.2%(RSD 1.85%).结论:该方法简便、快速、准确、灵敏度高,可用于该品的质量控制.
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不同酯化度果胶对苦豆子总碱水凝胶骨架片体外释放的影响
目的:制备苦豆子总碱水凝胶骨架结肠定位释放片,研究不同酯化度果胶对其释放行为的影响.方法:采用湿法制粒压片法制备不同酯化度果胶骨架片,分别考察其在模拟胃液、肠液中6 h释放情况,在此基础上采用Kollicoat MAE 30DP包衣,分析其在模拟胃液、肠液、盲肠液介质中的释放行为.结果:不同酯化度果胶能够明显影响其在模拟胃液、肠液中的释放.采用Kollicoat MAE 30DP包衣的低酯果胶配方E能够使苦豆子总碱中槐定碱结肠释放,近似零级释放模型,属骨架溶蚀释药机制.结论:肠溶包衣的低酯果胶骨架片靶向性强,能够使苦豆子总碱定位释放,从而提高疗效.
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槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响
目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7 巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制.方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+ LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液.Western blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-α mRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量.结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P＜0.01)；TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P＜0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义.结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一.
关键词： 槐定碱 TLR4/MD-2阻断剂 LPS RAW264.7巨噬细胞 TLR4 -
槐定碱致癫痫样作用研究
目的:观察槐定碱(sophoridine)致痫大鼠清醒核团脑电(IEEG)变化特点;研究痫样特征分类和致痫作用机制.方法:采用慢性埋藏电极记录清醒大鼠核团脑电(intracranial electroencepholography,IEEG)的方法,观察槐定碱对大鼠产生痫样放电的特点,并判断致痫原发部位;采用小鼠模型实施工具药拮抗实验,探讨槐定碱所致癫痫样发作的作用机制及类型.结果:海马齿状回(DG)内颗粒细胞对于槐定碱致病作用敏感,其次是内侧穿行通路(PP)和颞叶皮层(TC).阈下催眠剂量的地西泮、催眠剂量的巴比妥钠可以对抗槐定碱引起的痫样惊厥的发生;对抗大电休克剂量的苯妥英钠不能对抗槐定碱引起的痫样惊厥的发生,但可以减缓惊厥的发生时间和小鼠的死亡时间.结论:海马内部异常放电在槐定碱致痫作用中可能起到重要作用,海马部位可能是痫样发作的原发部位;槐定碱的致动物癫痫样发作属于临床小发作类型,地西泮是较理想的预防药物.
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槐定碱抗骨癌痛作用及其机制研究
目的:采用W256癌细胞诱导的骨癌痛模型大鼠探讨槐定碱抗癌痛药效及其作用机制.方法:采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛大鼠模型;造模10 d后选取模型复制成功的大鼠36只随机分为模型对照组及槐定碱治疗组,另取同期10只大鼠作为正常对照组;治疗组大鼠于造模第15天开始给予槐定碱25 mg· kg-1治疗10 d;各组大鼠给药前、后测量机械痛阈和热痛阈,末次给药后,对大鼠患肢进行放射学和组织病理学观察,并采用免疫组化法检测大鼠患肢肿瘤组织环氧酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:槐定碱可明显提高骨癌痛大鼠机械痛阈和热痛阈值(P ＜0.05,P＜0.01);改善肿瘤引起的骨损伤(P＜0.05),明显下调肿瘤组织COX-2,VEGF表达(P＜0.05).结论:槐定碱对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠有镇痛作用和抑制肿瘤发展作用,其机制可能与下调COX-2,VEGF的表达有关.
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HPLC同时测定苦豆草中7种生物碱的含量
目的:建立了用HPLC对苦豆草中苦豆碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱和莱曼碱同时定量的方法.方法:采用HPLC检测方法,色谱柱Waters X-Brige C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol·L-1的磷酸二氢钾溶液(2.0 mL·L-1三乙胺),进行梯度洗脱;检测波长为205 nm,柱温25℃,进样量10 μL,流速1.0 mL·min-1.结果:苦豆碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱和莱曼碱的浓度与峰面积,分别在20.66～103.32gμ(Γ=0.998 8),22.82～114.12 μg(Γ=0.999 7),25.10～125.52μg(Γ=0.999 1),23.88～119.40μg(Γ=0.997 5),5.00～24.99μg(Γ=0.9986),4.69～23.46μg(Γ=0.9996)和4.60～23.01μg(Γ=0.9978)范围呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.12%,97.47%,96.21%,94.64%,98.04%,96.24%和101.31%;RSD分别为7.3%,3.0%,4.5%,5.2%,5.4%,5.8%,4.3%.结论:该方法准确、简便,灵敏,为苦豆草的质量评价提供了依据.
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高效液相色谱法同时测定复方苦参注射液中的3种生物碱
复方苦参注射液是由山西金晶药业有限公司研制生产的抗癌纯中药制剂,是由苦参、白土苓经加工提取浓缩而制成,其成分主要为苦参碱、槐定碱及氧化苦参碱.
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槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达
目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制.方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组.槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液.RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量.结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P＜0.01),IκBα mRNA低于同时间点对照组(P＜0.01或P＜0.05)；槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P＜0.01或P＜0.05),而IκBα mRNA则显著升高(P＜0.01或P ＜0.05).结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一.
关键词： 槐定碱 LPS RAW264. 7细胞 NF-κB -
槐定碱抑制内毒素血症小鼠肾组织NF-κB通路活化的研究
为研究槐定碱干预对内毒素血症小鼠肾组织NF-κB通路的影响,以细菌脂多糖(LPS)引起的内毒素血症肾损伤小鼠为实验对象,槐定碱(12、6及3 mg·kg-1,ip)干预,RT-PCR检测肾组织IKKβ与TNF-α的mRNA表达,免疫组化检测磷酸化IKKβ蛋白(pIKKβ)表达,Western blotting与免疫荧光激光共聚焦显微镜观察肾组织NF-κB的表达与分布,放射免疫法检测血清中TNF-α的水平.结果显示,槐定碱(12、6及3 mg·kg-1)干预降低了内毒素血症小鼠肾组织IKKβmRNA及pIKKβ表达,抑制NF-κB P65蛋白表达并减少NF-κB P65蛋白入核率,从而使肾组织TNF-a mRNA表达及血清TNF-α含量减少.结果提示,槐定碱可抑制LPS引起的炎症反应,其机制可能与抑制NF -κB通路活化有关.
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津力达颗粒中苦参碱和氧化苦参碱及槐定碱鉴别方法的研究
目的 建立津力达颗粒中苦氧碱、氧化苦参碱及槐定碱鉴别方法和对照图谱.方法 采用薄层色谱法(TLC)对津力达颗粒中苦参碱和氧化苦参碱及槐定碱成分进行鉴别,并对影响色谱分离效果的主要因素(吸附剂、展距等)进行优化.结果 方法简便、重现性好,结果可靠.结论 TLC可用于津力达颗粒的定性鉴别,为提高质量标准提供了可靠的依据.
