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人卵体外成熟研究及临床应用进展
人卵体外成熟的概念及意义人卵体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术一般是指在不用或少量应用促性腺激素(gonadotropin,Gn)超促排卵的情况下,从患者卵巢中获取未成熟卵,或从手术离体的卵巢组织中直接分离未成熟卵泡,在体外经过适宜的条件进行体外成熟培养,使卵子成熟达到MⅡ期并具备受精能力.其意义主要在于:在不孕症治疗中免除患者超促排造成过度刺激的危险,尤其是多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者;由于不用或少用促性腺激素超排卵,节省医疗费用和就医时间;帮助解决卵巢组织或卵泡冷冻保存后卵细胞的成熟问题和未成熟卵冷冻保存后的应用问题,为卵巢去势患者保存生育力和建立"卵子库";开展有关人卵子成熟机制的基础性研究.
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卵巢移植对去势大鼠海马神经元和雌激素膜受体GPR30表达的影响
目的 观察去势大鼠卵巢移植后海马神经元形态、尼氏体数量和雌激素膜受体GPR30表达的变化,评价卵巢移植对海马神经元功能的保护作用.方法 成年雌性SD大鼠分为对照组、去势组和卵巢移植组.对照组行假手术,去势组行双侧卵巢切除,卵巢移植组在切除双侧卵巢7d后,肾被膜下移植出生3d内乳鼠的卵巢.于移植后的7、14、21和28 d,尼氏染色观察海马神经元形态、尼氏体数量;免疫组织化学法和Western blot检测GPR30蛋白的表达.结果 去势组随去势时间延长,海马神经元排列散乱,胞体皱缩,核固缩深染,神经元尼氏体数量减少(P＜0.05),GPR30表达减少(P＜0.05).卵巢移植组随移植时间的延长,细胞形态逐渐好转并与正常形态接近,海马神经元内尼氏体数量和GPR30蛋白表达逐步恢复,并接近对照组.结论 卵巢移植可以逆转去势所致神经元形态改变,并提高GPR30蛋白的表达,促进海马神经元蛋白合成功能的恢复.
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记忆增强肽对去卵巢大鼠行为和海马神经元NT-3、NF表达的影响
研究记忆增强肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能以及它对海马区神经营养素-3(NT-3)、神经丝蛋白(NF)神经元表达的影响.随机分三组,正常对照组,去卵巢对照组和去卵巢+记忆增强肽防治组,进行水迷宫测试和NT-3、NF免疫组化染色.发现去卵巢+记忆增强肽防治组游完全程的时间及错误反应次数均较去卵巢对照组少(P＜0.05),海马区神经元NT-3、NF的表达与正常大鼠相似,阳性细胞计数显著高于去卵巢对照组,平均灰度(免疫组化染色深,平均灰度数值小) 显著低于去卵巢对照组(P＜0.05).均提示记忆增强肽具有防治神经元退变的作用.
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APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元退行性变的作用
目的通过观察APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元退行性变的作用,证实APP17肽对神经元退行性变的改善作用. 方法雌性大鼠,行双侧卵巢切除手术造模,并于6周后皮下注射APP17肽进行治疗,手术后12周行水迷宫实验,至13周取血并行灌注固定,取脑海马组织作超薄切片电镜分析, 并作冰冻切片进行雌激素受体(ERα)、神经生长因子(NGF)及脑源性神经生长因子(BDNF )免疫组织化学染色,并用全自动化学发光免疫分析仪测定血清雌二醇水平. 结果卵巢去势组大鼠血清雌二醇水平降低,水迷宫检测卵巢去势组大鼠较正常组游完全程所须时间明显延长,错误反应次数明显增多,海马神经元超微结构出现明显损害;海马光镜观察发现ERα表达增多,NGF及BDNF表达减少.使用APP17肽治疗后并不改变血清雌二醇水平,但能明显改善海马神经元超微结构的损害,使上述有关蛋白质的表达恢复到正常水平. 结论 APP17肽不是通过改变雌激素水平来发挥改善神经元功能减退的作用,而可能是通过神经营养因子起作用.
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雌激素对卵巢去势兔膈肌和颏舌肌功能的影响
目的:观察雌激素对卵巢去势兔膈肌和颏舌肌功能的影响.方法:雌性兔,行双侧卵巢切除术,手术后第10天皮下注射17-βE2400μg/(kg·d)治疗,术后12周,引导膈肌和颏舌肌肌电.结果:雌激素组膈肌和颏舌肌肌电活动较去卵巢对照组明显增强,表现为肌电积分幅值增高、频率加快.结论:雌激素能加强去卵巢兔膈肌和颏舌肌的活动,具有调节呼吸和减小上呼吸道阻力的作用.
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机械加载在骨质疏松小鼠治疗中的应用研究
骨质疏松是绝经后妇女的一种严重疾病,并容易导致骨折。前期工作表明,脉冲性机械加载可以促进小鼠骨生长和骨损伤愈合。然而,我们的原创性脉冲性脊柱机械加载对小鼠骨质疏松的改善作用尚需探索。使用绝经后骨质疏松动物模型卵巢切除( OVX)小鼠,我们验证假设：脊柱机械加载通过促进成骨细胞的分化和抑制破骨细胞的发育治疗骨质疏松。 C57BL/6雌性小鼠(14周龄)随机分为3组：假手术组,OVX对照组和脊柱机械加载组(n=10)。小鼠施行卵巢切除去势手术,术后1周进行腰椎机械加载(1N,10Hz,5min/d,5d/week)2周。实验前后分别测量全身骨密度。应用HE和TRAP染色进行股骨的组织形态学分析。收集实验动物的骨髓来源细胞观测破骨细胞发育和成骨细胞分化。结果显示,与假手术组相比,OVX组小鼠体重增加,子宫重量减少,骨密度显著下降,骨小梁体积分数(BV/TV)显著减少(均P<0.001)。与OVX小鼠相比,脊柱机械加载显著改善骨密度的降低( BMD P<0.05；BMC P<0.01),增加骨容量( BV/TV；P<0.001)。 TRAP组织学染色显示OVX组多核破骨细胞形成明显增加,加载后明显抑制活跃的破骨细胞数目。骨髓来源细胞培养显示,加载显著促进间充质干细胞向成骨细胞分化(P<0.001)。此外,脊柱加载显著降低破骨细胞形成、并抑制其迁移和粘附(均P<0.001)。本研究表明,脊柱加载通过促进成骨细胞的分化,同时抑制破骨细胞的发育,改善OVX导致的骨丢失。 BMD、BMC和BV/TV的降低证实卵巢去势导致小鼠骨量减少；TRAP组织学染色显示OVX卵巢去势通过激活破骨细胞导致骨吸收增强。机械加载通过抑制破骨细胞的发育纠正骨质疏松小鼠的骨量丢失,同时刺激成骨细胞的分化促进骨重建。脊柱机械加载为绝经后妇女骨质疏松提供了新的治疗手段。
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APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元凋亡相关因子表达的影响
为研究卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关因子Fas、Fas-L、NFκB、c-fos、c-Jun的表达及APP17肽对这些因子表达的影响,将健康雌性Wistar大鼠行双侧卵巢切除手术造模,并用APP17肽治疗,分别用免疫组化方法观察Fas、Fas-L、NFκB、c-fos 、c-Jun的表达, 用TUNEL方法检测神经元的凋亡.结果发现:卵巢去势大鼠海马神经元Fas、Fas-L、c-fos、c-Jun的表达增高,而NFκB的表达则减少;使用APP17 肽治疗后,上述蛋白质的表达恢复到正常水平,TUNEL检测未发现凋亡神经元. 提示卵巢去势大鼠发生了海马神经元的凋亡相关蛋白的改变,可能是神经元处于凋亡前状态;APP17肽可改善卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关蛋白的表达,维持神经元的正常功能.
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卵巢去势在乳腺癌处理中的地位和作用
乳腺癌的治疗是以手术为主,其他治疗为辅的综合治疗.乳腺癌辅助治疗包括化学治疗、放射治疗以及内分泌治疗等.卵巢去势是乳腺癌内分泌治疗的重要手段.卵巢去势与放化疗相结合的辅助治疗,对于提高乳腺癌患者的预后有重要作用.但是,如何筛选合适的患者以及具体治疗方案还需要进一步探讨.归纳总结近年来几个重要的临床试验,探讨卵巢去势在乳腺癌治疗中的应用.
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乳腺癌内分泌治疗的药物选择与时机掌握
内分泌治疗是激素依赖型乳腺癌综合治疗的重要组成部分.雌激素受体调节剂、芳香化酶抑制剂、卵巢去势等是乳腺癌内分泌治疗的主要手段.各种方法的选择和治疗时机及其应用时限等,是临床关注的焦点.目前,三苯氧胺仍是绝经前患者的标准用药,但对绝经后患者而言,新一代芳香化酶抑制剂的使用会有更大的益处.本文结合正在进行的多个大宗临床试验,对乳腺癌内分泌治疗的药物选择和时机掌握予以综述.
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恶性肿瘤内科治疗讲座(四)乳腺癌的肿瘤内科治疗(下)
内分泌治疗:①卵巢去势手术:适于绝经前的晚期病人,雌激素受体(ER)阳性和孕激素受体(PR)阳性者疗效更好.有效率为30%～50%.②三苯氧胺(他莫昔芬、Tamoxifen,TAM):每次10～20 mg,口服,每日2次,可长期服用.
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红霉素软膏与乙烯雌酚治疗萎缩性阴道炎148例临床分析
老年性阴道炎(senele vaginitis)是自然绝经及卵巢去势妇女较为常见的妇科疾病之一,因卵巢功能衰退,雌激素水平降低,阴道壁萎缩,阴道粘膜变薄,阴道内PH值增高,局部抵抗了下降所致.笔者于2006年以来,应用红霉素软膏、乙烯雌酚等治疗老年性阴道炎148例,现将临床治疗及随访结果报告如下.
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大鼠卵巢去势后颌骨与全身骨的形态学研究
目的本实验通过切除大鼠双侧卵巢,观察颌骨的结构变化,了解其与全身骨结构变化的关系.方法SD雌性大鼠4月龄行双侧卵巢切除术,术后3个月处死收取标本,进行HE染色,光镜观察.结果切除卵巢后胫骨松质骨改变明显,牙槽骨仅个别密质骨见到活动性骨吸收,固有牙槽骨,松质骨及髁状突未见明显的改变.结论大鼠卵巢去势后全身骨骼的骨结构形态学改变明显,而颌骨骨结构的形态改变不明显.
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自然衰老法与卵巢去势法建立围绝经期小鼠模型的比较研究
目的:比较自然衰老法与卵巢去势法建立的ICR小鼠围绝经期模型,并对模型进行评价.方法:通过观察阴道脱落细胞,比较自然衰老组及卵巢去势组小鼠的动情周期情况;观察小鼠悬尾活动,比较自然衰老组及卵巢去势组小鼠的情绪状态;测定血清性激素,比较血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体激素(LH)、雌二醇(E2)的含量;测定小鼠下丘脑神经肽,比较下丘脑Kiss-1及其受体GPR54 mRNA的表达.结果:自然衰老组及卵巢去势组小鼠动情周期均紊乱,动情频率均减少;两组小鼠悬尾活动比均显著提高;两组小鼠血清的FSH、LH水平显著上升,E2水平明显降低;两组小鼠的下丘脑Kiss-1及受体GPR54 mRNA的表达显著升高.相比卵巢去势小鼠,自然衰老小鼠动情周期相对延长,动情频率明显减少,血清的FSH、LH水平上升更显著,E2水平降低更显著,KiSS-1/GPR54 mRNA的表达升高更明显.结论:自然衰老法与卵巢去势法均能建立小鼠围绝经期模型,而自然衰老法优于卵巢去势法.
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骨质疏松症与双侧卵巢切除术关系的探讨
近年来,绝经前妇女的生殖器肿瘤及乳腺癌的患病率逐渐增高,并有年轻化趋势.随着医疗水平的提高,通过手术切除、化疗、放疗等手段,生存率得到明显增高.但由于患者双侧卵巢切除后体内雌激素水平骤剧下降,导致骨质疏松症的发生,严重影响其生存质量.现将我科15例病例报告如下.1 资料与方法1.1 资料 1997～1999年共收治双侧卵巢切除后骨质疏松症15例.年龄24～54岁.双侧卵巢切除至发现骨质疏松短2个月,长8年.手术切除卵巢原因:卵巢恶性肿瘤6例,子宫内膜癌3例,官颈癌1例,乳腺癌行双侧卵巢去势手术4例,双侧卵巢脓肿手术切除1例.该组病例均无内科内分泌系统疾患或消化吸收障碍等.
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激素疗法与妇科恶性肿瘤的关系
近年来,妇科恶性肿瘤发病呈年轻化的趋势,据报道,2011年有超过75 000例美国妇女患有妇科恶性肿瘤[1].由于早期发现、诊断、治疗、广泛手术和规范化疗,提高了患者的生存率,但妇科恶性肿瘤无论是放射治疗或手术治疗后都会使卵巢去势,不可避免地在治疗后出现更年期综合征,导致一系列并发症而影响生活质量.激素疗法可以明显改善妇女绝经综合征,是治疗更年期综合征非常有效的方法.
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DMP1在去势大鼠颌骨中的表达
目的:观察卵巢去势骨质疏松大鼠上颌牙牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达变化.方法:选择三月龄健康雌性wistar大鼠40只,在SPF级动物房内适应性饲养一周后,随机分为二组:Sham组(假手术组,仅去除和双侧卵巢等大的脂肪组织)20只;Ovx组(手术组,去除双侧卵巢)20只.实验周期为12w.术后4w,8w,12w取材,根据实验需要留取腰椎和下颌骨.腰椎用于检测骨密度,下颌骨储存于液氮用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同组别不同时间DMP1的基因水平的表达.结果:术后12w时,OVX组腰椎骨密度与Sham组相比明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).术后4w及8w时,两组之间DMP1的mRNA表达比较无统计学差异(P＞0.05),术后12w时,Ovx组DMP1的mRNA表达显著高于Sham组,差别有统计学意义(p＜0.05).结论:卵巢去势骨质疏松大鼠下颌骨中DMP1 mRNA的表达明显下降,DMP1可能在雌激素缺乏所致骨质疏松的发生过程中具有一定的作用.
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卵巢去势对大鼠牙髓组织成牙／成骨能力的影响
目的：观察卵巢去势1个月对大鼠切牙牙髓组织中成牙、成骨指标的影响。方法：将10只成年雌性SD大鼠（8周龄）随机分为假手术组及卵巢去势组，每组各5只；在全麻下，将去势组大鼠双侧卵巢摘除，假手术组行相同切口，保留卵巢；1个月后，处死大鼠，分离牙髓组织，通过实时定量RT-PCR及Westernblot方法检测两组大鼠牙髓组织中成牙、成骨相关指标的表达。结果：去势组牙髓组织中，Runt相关转录因子2（Runt-relatedtranscriptionfactor2，RUNX2）、骨细胞特异性转录因子（Os-terix，OSX）、骨钙素（Osteocalcin，OCN）、牙本质涎蛋白（dentinsialoprotein，DSP）、牙本质涎磷蛋白（dentinsialophosphoprotein，DSPP）的基因和/或蛋白表达等成牙及成骨指标均较假手术组牙髓低，而碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）的表达无明显改变。结论：卵巢去势1个月可以明显降低大鼠切牙牙髓组织中成牙、成骨指标的表达，提示卵巢去势下调了牙髓细胞的成牙及成骨能力。
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雌二醇对去卵巢大鼠延髓毛细血管超微结构的影响
目的:观察雌激素对去卵巢大鼠延髓毛细血管超微结构的影响. 方法:30只雌性成年SD大鼠随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和假手术对照组(C组).A组和B组大鼠卵巢切除后10天起,分别皮下注射等渗盐水0.1 ml/d 、17-β雌二醇20 μg/(kg·d);C组只剖开腹膜,不切除卵巢.手术后10天起,皮下注射等渗盐水 0.1 ml/d.各组动物连续用药6周后观察结果. 结果:①血清雌二醇的浓度:A组明显低于C组(P<0.01),B组明显高于A组(P<0.01),而B组和C组比较无统计学意义.②电镜观察:A组延髓毛细血管有明显的损伤表现,内皮细胞肿胀变形,线粒体明显肿胀、嵴断裂,血管内皮外基膜增厚,部分结构不完整;B组的毛细血管损伤明显减轻;C组延髓毛细血管形态正常. 结论:雌激素对去卵巢大鼠延髓毛细血管有明显的保护作用.
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三羟基异黄酮对卵巢去势大鼠延髓神经元保护作用的研究
目的:观察植物雌激素三羟基异黄酮(GST)对卵巢去势大鼠延髓神经元的保护作用.方法:行双侧卵巢切除术的雌性大鼠造模,手术10天后皮下注射GST 200 μg/(kg·d)治疗.连续给药6周后,取动物脑的延髓部位检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并作超薄切片电镜分析.结果:GST组与去卵巢对照组(OVX组)比较,MDA含量减少、SOD活性增加(P＜0.01),形态学观察OVX组延髓神经元超微结构有明显的病理变化,而GST组能明显改善神经元的损伤,维持神经元结构的完整性.结论:GST对延髓神经元有明显的保护作用,其机制可能与清除氧自由基有关.
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卵巢去势引起神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白改变与UPAN的作用
目的通过观察去卵巢大鼠海马组织神经元凋亡相关蛋白的表达及用TUNEL试剂盒检测,研究缺乏雌激素是否引起神经元凋亡;评估UPAN是否能改善雌激素缺乏引起的凋亡,探讨雌激素缺乏引起神经细胞凋亡的机制与UPAN神经保护作用机制.方法♂ Wistar大鼠随机分3组:假手术组(C组),卵巢去势对照组(OVX组),UPAN治疗组 (UPAN+OVX组).C组做假手术,OVX组和UPAN+OVX组做双侧卵巢切除术.UPAN+OVX组从卵巢去势第7 wk开始用UPAN治疗6 wk,用免疫组化和Western blot观察AIF、Bax、Bcl-2的表达, 并用TUNEL试剂盒检测.结果免疫组化和Western blot结果表明去卵巢大鼠海马组织AIF、Bax表达增加,Bcl-2表达减少, UPAN治疗组这些蛋白表达恢复到接近正常.在去卵巢大鼠海马组织和皮层存在大量的TUNEL阳性细胞,UPAN治疗组TUNEL阳性细胞比卵巢去势对照组明显减少.结论去卵巢大鼠因雌激素缺乏引起神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白改变, UPAN具有明显的治疗作用.
