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NSCs-HA-NT-3复合物移植修复兔面神经损伤
目的 观察NSCs-HA-Col支架-NT-3复合物对兔面神经完全横断损伤修复效果.方法 新西兰大耳白兔41只.随机分为6组.E组为NSCs-HA支架-NT-3联合移植组.电生理于术前、术后1、4、8和12周记录肌电图的潜伏期、阈值、振幅.术后12周取桥接处神经,行BrdU及S100免疫组化染色,半薄切片及图像分析,透射电镜观察再生情况.结果 E组术后12周可见较多BrdU阳性细胞,电生理检测与正常对照无显著性差异,桥接处纵断面呈现连续或不连续波浪状;横断面髓鞘结构与正常对照组的较为相似.结论 NSCs-HA支架-NT-3复合物可以显著提高面神经损伤修复的效果.
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记忆增强肽对去卵巢大鼠行为和海马神经元NT-3、NF表达的影响
研究记忆增强肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能以及它对海马区神经营养素-3(NT-3)、神经丝蛋白(NF)神经元表达的影响.随机分三组,正常对照组,去卵巢对照组和去卵巢+记忆增强肽防治组,进行水迷宫测试和NT-3、NF免疫组化染色.发现去卵巢+记忆增强肽防治组游完全程的时间及错误反应次数均较去卵巢对照组少(P＜0.05),海马区神经元NT-3、NF的表达与正常大鼠相似,阳性细胞计数显著高于去卵巢对照组,平均灰度(免疫组化染色深,平均灰度数值小) 显著低于去卵巢对照组(P＜0.05).均提示记忆增强肽具有防治神经元退变的作用.
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CE对衰老小鼠免疫器官指数以及神经系统病理改变的影响
目的研究藏药旺拉有效活性成分CE对D-半乳糖(D-Gal)合并亚硝酸钠(NaNO2)建造的衰老小鼠免疫器官指数以及神经系统病理改变的影响.方法采用腹腔注射D-Gal(按体重120 mg/kg)和NaNO2(按体重90mg/kg)的方法建立衰老模型,以称重法测定胸腺指数和脾脏指数,经HE染色后观察小鼠海马部位的病理改变,用免疫组化染色方法测定海马内APP、Tau和NT-3的阳性细胞数,并进行灰度扫描以反映染色的深浅.结果D-Gal合并NaNO2建造的衰老小鼠免疫器官指数下降,而CE(按体重2.5、5、10 mg/kg,口服)可减轻免疫器官指数的下降程度.衰老小鼠脑中APP、Tau阳性神经元数量明显增加,且NT-3阳性神经元数量也减少,而CE(按体重2.5、5、10 mg/kg,口服)可抑制APP、Tau阳性神经元增多且可使NT-3的阳性细胞数增加.结论藏药旺拉有效成分CE可明显改善D-Gal合并NaNO2建造的衰老小鼠免疫器官指数和神经系统病理改变.
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bFGF和NT3基因共表达质粒对豚鼠庆大霉素耳蜗损害的防治作用研究
目的 探讨pBudCE4.1-bFGF-NT3基因共表达载体对豚鼠庆大霉素耳蜗损害的防治疗作用.方法 取健康豚鼠造模,分组,即:治疗组、预防组、对照组、NT3组、bFGF组.治疗组经右耳圆窗导入pBudCE4.1-bFGF-NT3、bFGF组、NT3组分别导人pCI-bFGF及pUC18-NT3;预防组在肌注庆大霉索前,先行导人共表达质粒:对照组导入SA-EGFP.各组动物分别进行ABR阈值的测试:耳蜗外毛细胞、螺旋神经节细胞计数并观察组织形态学变化.结果 ABR阈值测试,预防组、治疗组、NT-3组、bFGF组与对照组比较差异有显著意义(P<0.01),治疗组与NT-3组、bFGF组比较差异有显著意义(P<0.01),对照组,外毛细胞大面积缺失及细胞水肿坏死.而预防组、治疗组、N1r3XEG、bFGF组外毛细胞缺失等渍理性改变均显著减轻.毛细胞计数:预防组、治疗组、NT-3组、bFGF组与对照组比较差异有显著意义(P<0.01),治疗组与NT-3组、bFGF组比较差异有显著意义(P<0.01).对照组螺旋神经节细胞大面积坏死肿胀和消失,而预防组、治疗组、NT-3组、bFGF组仅有少数的螺旋神经节细胞发生退行性病变和损失.螺旋神经节细胞计数:预防组、治疗组、NT-3组、bFGF组与对照组比较差异有显著性(P<0.01),预防组、治疗组与NT-3组、bFGF组与比较差异有显著性(P<0.01).NT-3组与bFGF组比较差异有显著性(P<0.01).结论 pBudCE4.1-bFGF-NT3真核共表达载体,可有效预防和治疗庆大霉素对豚鼠耳蜗的损害.
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低强度脉冲超声对雪旺细胞增生及NT-3基因表达的影响
目的 研究培养的雪旺细胞在低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)直接作用下,对细胞增生、NT-3及脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA表达的影响.方法 取新生1-3 d Wistar大鼠坐骨神经,经过酶消化分离雪旺细胞,培养在6孔板上.每天给予超声频率1 MHz及声强(SATA)0.1W/cm25 min连续刺激,持续14 d.对照组除不给予超卢刺激外,其他条件与实验组相同.采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶实验(BrdU摄人实验)检测细胞增生率的变化,免疫组化及RT-PCR实验检测细胞因子的变化.结果 免疫组化结果显示,分离的雪旺细胞标记物S-100鉴定98%以上阳性.BrdU摄入实验发现受超声刺激的细胞在培养第4,7,10,14天细胞增生率较对照组增高,其中前3个时间点差异具有统计学意义.在刺激第14天,实验组NT-3mRNA水平较对照组有显著上调,NT-3/β-actin比值分别为0.56±0.13和0.41±0.09(n=6,P<0.05).而BDNF水平实验组较对照组显著下调,BDNF/β-actin比值分别是0.51±0.05和0.60± 0.08(n=6,P<0.05).免疫细胞化学证实2组雪旺细胞NT-3及BDNF均有超过98%的阳性率,但表达强度不同.结论 给予低强度脉冲超卢刺激可促进培养的雪旺细胞增生及神经生长因子表达的改变,本研究为低强度脉冲超声的应用提供了,理论依据.
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大鼠脊髓全横断后相邻节段脊髓背角神经元NT-3的表达
目的：研究大鼠脊髓全横断后，NT-3在损伤部位相邻节段脊髓背角神经元随时间的表达变化，为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法体重为250 g左右成年SD大鼠48只，随机分为六组。分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1天、3天、7天及14天组。动物到达存活时间后，应用免疫组织化学SABC 法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段背角的表达和分布。结果正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在背角的神经元。损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数，在脊髓背角的表达，均于术后1天组开始明显增高并达到高峰，术后3天、7天组逐渐回落，术后14天组接近正常水平。而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数，在脊髓背角的表达均于术后1天组开始明显增高，术后3天组达到高峰，于7天组开始下降，到14天组接近正常水平。结论在脊髓全横断术后，脊髓神经元对NT-3的需求增加，提示NT-3在脊髓修复中起重要作用。
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脊髓全横断后腹角神经元NT-3的表达
目的 研究大鼠脊髓全横断后,NT-3在损伤部位相邻节段眷髓腹角神经元随时间的表达变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 体重为250g左右成年SD大鼠48只,随机分为六组.分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1,3,7,14d组.动物到达存活时间后,应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段腹角的表达和分布.结果 正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在腹角的大神经元和少量小神经元.损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达,均于术后1d组开始明显增高并达到高峰,术后3d、7d组逐渐回落,术后14d组接近正常水平.而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达均于术后1d组开始明显增高,术后3d组达到高峰,于7d组开始下降,到14d组接近正常水平.结论 在脊髓全横断术后,脊髓腹角神经元对NT-3的需求增加,提示NT-3在脊髓修复中起重要作用.
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乳鼠海马神经细胞的原代培养以及冻存复苏方法
海马神经元作为边缘系统的重要组成部分,在结构上具有高度序化板层结构和神经元相对独立分布等特点,因而成为理想的神经科学研究模型[1].鼠类出生时的神经元和神经胶质细胞均未分化成熟,好的脑细胞培养物都来自于临产(21d)的胚胎和新生动物.
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全脑缺血再灌注大鼠额、颞、顶叶NT-3和FGF的表达
目的 探讨血管性痴呆大鼠额、颞、顶叶的神经营养因子3(NT-3)和成纤维细胞生长因子(FGF)的含量变化,揭示血管性痴呆的发病实质.方法 选用Wistar老龄大鼠随机分为假手术组(4只),实验组.实验组再分为全脑缺血15min组,缺血15min再灌注1、6 h、2、4、9 d组.每组5只.用免疫组化ABC法检测缺血再灌注不同时相额、颞、顶叶NT-3和FGF含量.结果 正常老龄大鼠额、颞叶有少量NT-3表达,但顶叶无NT-3表达.额叶缺血再灌注1 h NT-3表达迅速增加,并持续到再灌注4 d.再灌注9 d减量;颞叶再灌注2～4 d NT-3表达出现高峰;顶叶再灌注6 h～9 d出现NT-3少量表达.正常老龄大鼠额、颞、顶叶均有少量FGF表达;额叶再灌注6 h FGF表达开始增加,再灌注2～4 d出现高峰;颞、顶叶再灌注6h,FGF表达也开始增加,再灌注4 d出现高峰.结论 额叶对缺氧、缺血具有反应速度快、作用时间长的NT-3保护机制,颢叶这种保护机制略弱于额叶,顶叶缺乏这种良好的保护机制;额、颞、顶叶均具有良好的FGF神经元保护机制.
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固本健脑法对老年健忘模型大鼠海马脑区HSP70、NGF和NT-3表达的影响
目的:探讨固本健脑法改善模型大鼠学习记忆功能的作用机制.方法:腹腔注射D-半乳糖和NaNO2制造老年健忘大鼠模型,分别运用固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方进行治疗,检测各组动物海马脑区HSP70、NGF和NT-3的表达.结果:固本法可增加模型大鼠海马CA,区NGF和NT-3表达水平.结论:固本法可致通过减轻神经元损伤,改善模型大鼠学习记忆功能.
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早期干预对脑损伤仔鼠大脑中NT-3表达的影响
NT-3可作为促细胞分裂因子或诱导神经元分化的因子,维持胚胎发育中神经元的存活,并促进其分化与增殖[1].BELL MJ等采用孕鼠子宫颈注射脂多糖致仔鼠脑损伤,研究新生鼠及成年鼠的行为状况及免疫组化改变[3].通过孕鼠腹腔注射脂多糖已能成功制备脑损伤动物模型并有进行早期丰富环境刺激和神经行为学检测的研究报道[4].
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奥拉西坦对新生大鼠脑损伤中NT-3蛋白的相关研究
目的:制备HIBD模型,应用神经细胞营养剂一奥拉西坦,探讨其对神经再生、修复及其可能的机制,同时观察HIBD后神经营养素-3(NT-3)的动态变化.方法:经乙醚麻醉新生7日Wistar大鼠(相当于人类新生儿期)后,于颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉,动物休息静止2h,放入含有8％氧气和92％氮气的密闭容器持续2h,制备成HIE模型.将缺血缺氧后出现左旋或夹尾左旋者纳入试验.随机共分为3组,雌雄不限,体重在13 ～ 15g,每组25只.(1)空白组:分离左侧颈总动脉后下置线,不结扎,不缺氧.(2)模型组:制备大鼠缺血缺氧性脑损伤模型后立即腹腔注射生理盐水0.1mL/只.(3)治疗组:造模成功后立即腹腔注ORS 100mg/kg.所有动物于6h,12h,24d,36h,后断头取脑,通过免疫组化方法检测各时间点NT-3的表达情况.结果:通过免疫组化分析各组比较,可见治疗组NT-3表达多,模型组表达次之,空白组表达少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:证明奥拉西坦的神经保护作用及NT-3在新生儿缺氧缺血性脑损伤中发挥重要的作用.
关键词： 新生儿缺氧缺血性脑损伤 奥拉西坦 NT-3 -
骨髓单个核细胞对大鼠脊髓损伤后行为功能影响的研究
目的:通过建立大鼠脊髓半横断模型,观察骨髓单个核细胞(BMMNCs)对大鼠后肢功能及受损脊髓组织中神经营养因子3(NT-3)表达的影响.方法:无菌条件下取大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞,用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞备用.将104只Wistar大鼠随机分为A组(假手术组),8只;B组(PBS对照组),48只;C组(BMMNCs实验组),48只.大鼠术后1d、3d、5d、7d、14d和21d行BBB评分后,用免疫组织化学技术观察各组大鼠受损脊髓组织中NT-3的表达.结果:各个时间点BBB评分测试表明A组较B、C组分值高(P＜0.05);B组分值较C组低(P＜0.05).免疫组织化学技术检测显示各个时间点C组大鼠受损脊髓中NT-3的表达量高于B组(P＜0.05),A组与B、C组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:BMMNCs能够促进损伤脊髓组织中NT-3的表达,可能是其修复损伤脊髓,促进脊髓功能恢复的机制之一.
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电针对MCAO大鼠海马组织形态学及神经元NT-3蛋白表达的影响
目的:研究电针对线栓法栓塞大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)大鼠海马组织形态学及神经元NT-3蛋白表达的影响.方法:HE染色观察电针人中、内关及曲池、足三里对MCAO大鼠脑海马CA1区神经元死亡率及微血管数目的影响.免疫组织化学染色法及图像分析系统观察对神经元NT-3蛋白表达的影响.结果:电针人中、内关可显著降低MCAO大鼠海马CA1区神经元死亡率,可显著提高NT-3蛋白阳性细胞表达率及阳性表达光密度值.结论:电针可提高MCAO大鼠海马NT-3蛋白的表达,推测这是电针降低神经元死亡率,发挥脑缺血保护作用的机制之一.
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推拿对坐骨神经损伤大鼠NT-3、TrkC的影响
目的 研究推拿对坐骨神经损伤大鼠感觉功能及NT-3、TrkC表达的影响.方法 采用夹持法建立坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,以按摩推拿手法模拟仪进行干预,通过热痛阈实验观察各组大鼠行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠背根节内NT-3、TrkC表达情况.结果 模型组、模型对照组大鼠的PWL值与正常组相比明显延长,推拿组与模型组相比PWL值明显缩短,与正常组相比无显著差异.模型组、模型对照组及推拿组NT-3免疫组化表达与正常组比较均有明显提高,推拿组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,对神经元胞体和突起的生长产生积极的影响,促进损伤神经的修复,改善坐骨神经损伤大鼠的感觉功能.
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下颌下腺内NT-3的表达及意义
目的对成人及大鼠下颌下腺内NT-3的定性、定位及生物学意义进行研究.方法采用HE和免疫组织化学SABC染色方法.结果成人下颌下腺导管上皮细胞呈NT-3免疫反应阳性,其中以纹状管为明显.大鼠下颌下腺颗粒曲管、纹状管及小叶间导管上皮细胞呈NT-3免疫反应阳性.两者的导管上皮细胞核和腺泡细胞均为阴性.结论成人及大鼠下颌下腺中有NT-3的表达,提示NT-3可能参与了下颌下腺复杂的分泌功能.
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NT-3转染的BMSCs联合异体去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损
目的 通过NT-3转染的BMSCs联合去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损,观察神经移植体传导速度及靶器官功能恢复.方法 60只实验大鼠随机分为4组,各组均造成1 cm长左下肢坐骨神经缺损.A组应用自体神经修复,B组应用去细胞异体神经,C组应用去细胞异体神经+BMSCs,D组应用去细胞异体神经+转染NT-3的BMSCs.移植后1、4、8周肉眼观察大鼠足部溃疡形成及愈合情况,移植后4、8、12周切片观察移植体再生情况,肌电图检测神经传导速度及小腿三头肌恢复率.结果 移植1周后,各组均有下肢溃疡形成,4周后恢复；8周后切片观察,A组及D组神经纤维直径及髓鞘数量均明显优于B、C组；12周时,神经传导速度A组明显优于其余3组,D组优于其余2组(P＜0.05)；小腿三头肌湿重恢复率D组也明显优于其余2组(P＜0.05).结论 去细胞同种异体神经联合转染NT-3的BMSCs作为神经缺损的修复材料,不仅能够提供良好的支架作用,有效地提高神经传导速度的恢复,对靶器官的恢复也具有较明显的促进作用.
关键词： NT-3 骨髓间充质干细胞(BMSCs) 去细胞神经移植 神经缺损 -
慢性应激对大鼠海马NGF、NT-3表达的影响及应激停止后的变化
目的 探讨慢性应激对大鼠海马神经元NGF、NT-3蛋白表达的影响及其应激停止后的变化. 方法 采用慢性强迫游泳和孤养制作动物模型.运用open-field法观察大鼠行为学的变化,运用免疫组织化学方法观察大鼠海马DG区、CA3区NGF、NT-3的表达. 结果 与对照组相比,实验组1大鼠海马CA3、DG区NGF、NT-3的平均灰度值显著增加[灰度值分别为(187.25±0.87),(169.67±0.94),(183.49±0.21),(157.33±0.39),P＜0.05和P＜0.01],实验组2平均灰度值与对照组2相比同样增加[灰度值分别为(186.31 4±0.68),(170.30±1.22),(187.79 4±1.01),(162.79±0.98),P＜0.05]. 结论 慢性应激使大鼠海马NGF、NT-3表达降低,应激30d后,其表达仍低于对照组.
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内源性神经营养因子-3在脊髓损伤后期大神经元轴突出芽中的作用
神经营养因子-3(NT-3)不仅能为损伤神经元的修复提供有利的微环境,且具有维持和促进神经元存活、分化和再生等多方面的作用~([1]).前期研究结果显示,脊髓部分去传人术后早期,脊神经节(DRG)中主要是中、小型神经元表达NT-3增加.本研究旨在观察在脊髓去传人损伤中后期的可塑性修复中,内源性NT-3对DRG大型神经元是否有重要的神经营养作用,其有髓神经纤维直接投射的脊髓节段是否存在终末再生出芽的差异变化.
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神经营养素-3在脊髓损伤中的应用进展
脊髓损伤修复一直是医学界的难题,因损伤后的神经细胞难以再生、运动功能难以恢复,造成终身瘫痪并容易出现多种并发症甚至危及生命.目前,神经营养因子的缺乏被认为是脊髓损伤后修复面临的主要问题之一[1],通过微环境诱导神经细胞的再生成为治疗脊髓损伤的研究热点.至今为止,神经营养素-3(NT-3)是已经被Zhou等[2]证实能够在脊髓损伤后促进皮质脊髓束轴突生长的有效神经营养因子.
