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电项针对全脑缺血VD模型大鼠PI3 K/AKT/GSK-3β信号通路的影响
目的 研究电项针对全脑缺血血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(Phosphatidylinositol-3 kinase /serine-threonine kinase/ glycogen synthase kinase-3β,P13K/AKT/GSK-3β)信号通路的影响.方法 采用四血管阻断方法制备VD模型大鼠,电项针组取双侧风池穴、供血穴,电针30 min/次,1次/d,治疗14 d.采用Y迷宫评价大鼠学习记忆能力;荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot法检测大鼠海马组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphorylatedproteinkinaseB,p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(Phospho-rylated GSK-3β,P-GSK-3β)mRNA和p-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达.结果 与模型组比较,电项针组可显著提高VD大鼠Y迷宫学习与记忆正确次数(P<0.01).与模型组比较,电项针组大鼠海马组织中p-AKT、p-GSK-3βmRNA和p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达均有不同程度的升高(P<0.01).结论 电项针能够改善VD模型大鼠学习记忆能力,具体机制可能是激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,发挥抗凋亡作用,起到对缺血海马神经元的保护作用.
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参芎化瘀胶囊对全脑缺血大鼠海马CA1区GAP-43和P75NTR表达的影响
目的:探讨参芎化瘀胶囊对全脑缺血大鼠海马CA1区生长相关蛋白43(GAP-43)和神经营养因子低亲合力受体(P75NTR)表达的影响.方法:清洁级SD雄性大鼠72只,分正常对照组、全脑缺血模型组和参芎化瘀胶囊+全脑缺血组(灌胃剂量:480 mg·kg-1 ·d-1,每日1次,早上8:00给药),每组24只,取3,7,14d3个时间点.制备全脑缺血模型.水迷宫评价学习记忆能力,HE染色观察组织病理学的变化,免疫组化法观察GAP-43表达,蛋白印迹分析检测GAP-43和P75 NTR蛋白含量.结果:①行为学:和正常对照组比较,模型组大鼠各个时间点逃避潜伏期时问明显延长(P＜0.05),参芎化瘀胶囊组大鼠逃避潜伏期时间较模型组缩短(P＜0.05)；②HE染色显示:与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元3～14 d进行性坏死,存活神经元减少,参芎化瘀胶囊组各个时间点正常神经元计数和模型组比较有差异(P＜0.05)；③GAP-43免疫组化和蛋白印迹结果:和正常组比较,模型组GAP-43的表达3d升高,7d明显,14 d下降；和模型组比较,参芎化瘀胶囊组3,7,14d持续性升高,各个时间比较均有差异(P＜0.05)；④P75NTR蛋白印迹结果分析:和正常组比较,模型组的表达3d升高,7d明显,14 d下降；和模型组比较,参芎化瘀胶囊组3,7,14 d持续性升高,所有时间点比较均有差异(P＜0.05).结论:参芎化瘀胶囊增强全脑缺血大鼠海马CA1区GAP-43和P75 NTR的表达.
关键词： 全脑缺血 参芎化瘀胶囊 生长相关蛋白-43 神经营养因子低亲合力受体 -
全脑缺血再灌注对大鼠延髓内脏带NADPH-d阳性神经元分布与Fos蛋白表达的影响
目的观察大鼠全脑缺血/再灌注不同时间点延髓内脏带(MVZ)内NADPH-d阳性神经元与Fos蛋白表达的变化及相互关系. 方法采用4血管闭塞(4VO)改良法以及运用NADPH-d组织化学反应和Fos 免疫组织化学反应及双重染色技术对全脑缺血30 min,再灌注2 h、4 h、8 h、12 h、 24 h、48 h对MVZ进行研究. 结果脑缺血组MVZ内NADPH-d阳性神经元染色反应增强和Fos蛋白表达随脑缺血后再灌注时程而变化,并见有15%～20%阳性双染细胞. 结论在全脑缺血再灌注过程中,MVZ内NADPH-d阳性神经元与Fos蛋白表达的分布变化具有相关性,提示在脑缺血状态下MVZ参与机体的应激反应.
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降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响
目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响.方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法.结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱;缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强(P＜0.01);CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05).假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达;缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强(P＜0.01),缺血后再灌注3 h强,1 d、3 d时弱;CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱(P＜0.05);CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3 h时强,1 d、3 d时弱. 结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-junmRNA及蛋白表达,联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达,两者对保护缺血神经元可能有协同作用.
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缺血后处理通过上调磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B阻断细胞色素C释放防护缺血性神经元损伤
目的 通过观察脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)及细胞色素C的表达及定位情况,探讨延迟性脑缺血后处理神经保护作用及其可能的分子机制.方法 制作SPF级成年雄性SD大鼠(40只)四动脉结扎全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组,缺血再灌注组,后处理组,抑制剂组及溶剂对照组.采用焦油紫染色技术观察大鼠海马CA1区神经元存活情况；Western blotting法检测磷酸化Akt及细胞色素C的表达及定位.结果 延迟性的脑缺血后处理能够促进缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元生存；促进磷酸化Akt水平升高；阻止线粒体内细胞色素C向胞质释放；脑室注射LY294002后,细胞色素C的释放减少,抑制延迟性后处理的神经元保护作用.结论 延迟性脑缺血后处理通过诱导胞质内Akt的磷酸化,抑制线粒体内细胞色素C释放到胞质,阻止全脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元损伤.
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亚硝酸钠对大鼠心肺复苏脑保护的影响
心肺复苏患者心跳骤停后脑组织经历了严重的全脑缺血-再灌注损伤,既往流行病学资料表明,即使患者恢复自主循环,仍有高达55％ ～71％的院内病死率[1].亚硝酸盐既往被认为是一氧化氮的代谢产物,但目前研究发现,在组织缺氧时亚硝酸盐可作为底物被还原为一氧化氮,从而起到保护脑组织缺氧的作用.本试验采用窒息型大鼠心肺复苏模型,用亚硝酸钠进行干预,观察大鼠心肺复苏后大脑皮层枕叶一氧化氮的含量以及细胞凋亡的发生,用以进一步探讨亚硝酸钠在心肺复苏后脑保护中的作用.
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脑缺血后髓鞘基因表达变化的规律
目的 从髓鞘碱性蛋白(MBP)mRNA、髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG)mRNA等髓鞘基因表达的角度,探讨脑缺血大鼠髓鞘损伤的变化规律.方法 采用SD大鼠四血管闭塞急性全脑缺血模型,随机分为2 d、4 d、7 d、14 d和28 d五个时间点及假手术组,每组8只;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察海马组织中MBP mRNA、MOG mRNA表达的变化.结果 脑缺血后2 d海马组织中MBP mRNA、MOG mRNA表达水平即已降低,至7 d时降低显著,并持续至28 d时达到高峰.与假手术组比较,大鼠海马组织内MBP mRNA、MOG mRNA表达于再灌流后7 d、14 d、28 d差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 随着脑缺血-再灌流时间延长,大鼠海马组织MBP mRNA、MOG mRNA表达逐渐降低,呈现时间依赖性.
关键词： 髓鞘基因 全脑缺血 海马 逆转录聚合酶链式反应 -
心搏骤停后脑缺血缺氧损害与脑复苏
心搏骤停是全脑缺血缺氧性损害为重要的原因.心搏骤停及心肺复苏后的一系列病理生理过程可触发易损区域(海马、皮层、丘脑等)神经细胞的缺血缺氧性损害.大量的神经细胞坏死和凋亡后引起相应的神经功能障碍,包括顺行性记忆缺失,学习困难,情绪和社会行为改变,抑郁,严重的出现昏迷、持续植物状态直至死亡.
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学习记忆训练对全脑缺血大鼠认知能力的影响及其胆碱能机制
目的:探讨学习记忆训练对全脑缺血大鼠空间学习记忆能力的影响及其胆碱能机制.方法:选用健康雄性SD大鼠90只随机分为假手术组、对照组、训练组.采用改良Pulsinelli's 4血管闭塞法制作全脑缺血大鼠模型.术后1周以Y型电迷宫训练大鼠,分别在训练7d、14d、21d后应用Y型电迷宫检测比较三组大鼠的空间学习记忆能力的差异.结果:训练21d后,对照组与假手术组和训练组比较,Y型电迷宫全天总反应时间和潜伏期明显延长(P＜0.05),错误反应次数明显增多(P＜0.05).对照组神经元明显水肿,细胞器明显减少.训练组神经元细胞大、圆,细胞质丰富.对照组CA1区乙酰胆碱转移酶的光密度值明显低于假手术组和训练组(P＜0.05),而训练组和假手术组之间差异无显著性意义(P＜0.05).结论:学习记忆训练可以改善全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,其机制可能是训练增加了乙酰胆碱转移酶的活性或训练抑制了乙酰胆碱转移酶活性的降低.
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选择性钙通道阻滞剂对脑缺血再灌注损伤治疗作用及其抗自由基机制的研究
西比灵作为第四代选择性的钙通道阻滞剂,对缺血性脑血管病的防治有较好的疗效,已得到充分证实.但西比灵对全脑缺血再灌注损伤模型海马CA1区的病理变化以及相应氧自由基丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化的影响,报道较少.我们研究的目的是观察西比灵在治疗全脑缺血再灌注损伤模型中的作用;了解其对氧自由基含量的影响;探讨对全脑缺血再灌注损害的保护作用机制.
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亚低温对局灶性脑缺血保护作用实验条件的研究进展
目前,已经证实亚低温对脑外伤、脊髓损伤和全脑缺血具有保护作用,其对大脑中动脉阻塞(MCAO)的神经保护作用也受到广泛关注,而实验条件直接影响到实验结果的可信性和科学性.
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缺血性卒中的低温治疗
1 引言业已证实,低温在急性局灶性和全脑缺血实验模型中具有神经保护作用[1].尽管其神经保护机制尚待完全阐明,但低温能影响脑缺血过程的多种病理生理学机制.缺血核心(不可逆性受损的神经元)及其周围低灌注区(即"缺血半暗带")的概念已被广泛接受[1-5].尽管缺血半暗带内的神经元出现功能障碍,但如能及时恢复灌注,仍可恢复正常[3,5].局灶性脑缺血时,低温通过延缓或阻断缺血性细胞死亡的发生,作用于半暗带这一关键部位,发挥其神经保护作用.
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沙土鼠全脑缺血适应性再灌注脑保护的凋亡机制研究
脑梗塞、重度脑外伤或外伤性脑血管病、颈内动脉狭窄介入治疗一次性再灌注再通时易致脑血管收缩功能紊乱,引起脑灌注压突破致脑组织再灌注损伤.控制性低流量再灌注可以减轻一次性再灌注损伤,有较好的脑保护作用.脑适应性再灌注(adapted reperfusion,AR)是全新的再灌注观念,是相对于一次性再灌注而言的灌注方法,它将再灌注量和时机的动态观念引入缺血-再灌注损伤的机制及治疗研究之中,即在血液稀释的基础上,进一步控制灌注的量,改一次性灌注为控制性灌注,通过控制再灌注量及时机,对改善脑缺血的预后和神经康复具有重要理论及临床意义[1].本实验通过开放不同时间段,开放不同管径的脑血流量,来动态观察脑缺血损伤后的神经功能变化.
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缺血性脑卒中的神经保护治疗
急性缺血性脑卒中的治疗主要通过2个途径:一是溶解血栓;二是阻止缺血引起的脑组织一系列的病理及生化反应,防止神经元的死亡,即神经保护治疗.一、神经保护的合理性脑梗死的发生取决于脑血流(CBF)量下降的程度及持续时间.全脑缺血时,神经元的死亡发生于选择性脑组织易损区,其形态学改变出现在缺血后2～3 d.局灶性脑缺血时,梗死发生于动脉阻塞后4～6 h,24 h后梗死区则明显可见.
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大鼠海马脑区在全脑缺血及再灌注状态下NO浓度变化的动力学研究
目的 探讨大鼠海马区在全脑缺血及再灌注状态下NO浓度变化的动力学.方法 通过四动脉结扎造成大鼠全脑缺血模型,应用NO电极对大鼠海马区在全脑缺血及再灌注状态下NO浓度变化进行实时检测.结果 按照时间进程和NO浓度的变化量,整个NO浓度变化过程可以分为5个时相:第一时相, 在缺血早期, 有一个NO浓度的显著下降,从开始下降到下降到低点,在时间上大约为5 min;第二时相, NO下降开始到低点后,出现一个NO浓度变化的稳定期,时间上约占4 min; 第三时相,轻度的NO浓度上升,直到再灌开始,该时相大约为10 min; 第四时相,一旦再灌开始,有一个急性上升期,维持时间为4 min;第五时相, 为另一稳定期,约为1 h.结论 在全脑缺血过程中,海马区NO浓度的变化具有波动性,导致NO浓度波动变化的机理有待于进一步研究.
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高压氧对全脑缺血大鼠海马神经元凋亡及代谢的影响
目的 探讨高压氧时全脑缺血大鼠模型海马神经元凋亡及代谢的影响.方法 成年雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、全脑缺血未治疗组和高压氧治疗组.采用改良的Pulsineli法制作全脑缺血大鼠模型.治疗组给予高压氧(2ATA)lh/d,连续5d;应用Nissl染色检测大鼠海马神经元数,免疫组化检测大鼠海马caspase-3蛋白表达,电镜观察其神经元超微结构.结果 高压氧治疗组与未治疗组相比大鼠海马CAl区神经元计数明显增加,差异有显著性(P＜0.05).高压氧治疗组大鼠海马CAl区caspase-3蛋白表达阳性细胞计数明显低于未治疗组,差异有显著性(P＜0.05).结论 严重全脑缺血损伤急性期应用高压氧可抑制凋亡相关基因的表达,改善神脑组织的能量代谢,具有神经保护作用.
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匹诺塞林对脑线粒体呼吸功能的促进作用
匹诺塞林是一种广泛存在于蜂胶和植物中的黄酮类天然化合物,具有抗菌、抗炎、抗氧化、神经保护等多种药理作用.本实验利用大鼠全脑缺血模型(4-vessel occlusion,4-VO),评价了匹诺塞林在体内对4-VO大鼠脑线粒体功能的保护作用.结果表明,匹诺塞林能显著提高4-VO大鼠脑线粒体的ADP/O比值、V3以及RCI、OPR等参数,保护线粒体结构完整性;体外实验表明,匹诺塞林能显著提高分离的脑线粒体的ADP/O、V3、RCI、OPR,降低V4,保护线粒体结构完整性;同时,匹诺塞林在体外条件下促进脑线粒体ATP的生成;在细胞水平,匹诺塞林能促进SH-SY5Y细胞的ATP生成.本研究发现,匹诺塞林通过保护线粒体结构完整性,降低NADH呼吸链的电子漏流,提高氧化磷酸化效率,促进线粒体呼吸功能,提升线粒体ATP合成能力等起到脑缺血保护作用.
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依达拉奉对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤的治疗作用
目的 评价依达拉奉对大鼠全脑缺血再灌注损伤的治疗作用,为其在临床的应用提供实验依据.方法 采用大鼠四动脉阻断(4VO,20 min)制备全脑缺血再灌注模型,用尼氏染色方法考察依达拉奉注射液对海马CA1区神经元病理损伤的影响,生化方法进行脑组织中氧化-抗氧化指标的测定,线粒体氧耗测定仪进行脑线粒体呼吸功能的评价.结果 依达拉奉(3 mg·kg-1,iv)对于大鼠全脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经元的形态及数量均有显著改善作用;可显著抑制氧化应激导致的脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性改变,降低丙二醛(MDA)、NO、髓过氧化物酶(MPO)的含量;显著提高线粒体NADH/FADH2呼吸链的ADP/O、V3、RCI、OPR,提高氧化磷酸化效率.结论 依达拉奉通过抑制氧化应激、改善线粒体呼吸功能,从而发挥其对于大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用.
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健脑方促进脑缺血后大鼠海马神经发生的作用研究
目的 观察中药健脑方对脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生以及空间学习记忆功能的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组.采取永久结扎双侧颈总动脉制作全脑缺血模型.术后治疗组给予健脑方灌胃干预,模型组给予等量生理盐水.使用BrdU标记技术观察缺血后海马齿状回的神经发生,采用Morris水迷宫试验评价大鼠空间学习能力.结果 模型组和治疗组海马齿状回BrdU阳性细胞数分别在缺血后第7天达到高峰.而缺血后7、14、20、28 d治疗组BrdU阳性细胞数明显多于模型组(P＜0.05或P＜0.01).水迷宫试验显示术后第14天治疗组大鼠寻台平均时间明显短于模型组(P＜0.05).结论 健脑方能持续明显促进脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生,并改善大鼠的空间学习能力.
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C57black/6小鼠全脑缺血模型Fas-L和Caspase-3的表达
目的 应用C57black/6小鼠制备全脑缺血模型,观察脑缺血后大脑皮质、丘脑、下丘脑杏仁核部位Fas-L和Caspase-3基因的表达.方法 双侧颈总动脉夹闭(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)15 min,造成全脑缺血,24 h后取脑组织进行Fas-L和Caspase-3免疫组织化学染色.结果 Fas-L阳性细胞广泛分布在大脑皮质、丘脑、下丘脑、杏仁核.除丘脑外,缺血组其他部位Fas-L阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P＜0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P＜0.01).Caspase-3阳性细胞在大脑皮质、丘脑、下丘脑均有表达,缺血组各区域阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P＜0.05,P＜0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P＜0.01).结论 双侧颈总动脉夹闭法可复制C57black/6小鼠全脑缺血模型,缺血再灌注24 h后,Fas-L和Caspase-3基因在多个区域表达增加.提示该全脑缺血模型中,神经元死亡信号传导需要Caspases基因家族成员表达的加强,且存在缺血后神经元死亡信号传导的外源性通路.
关键词： C57black/6小鼠 全脑缺血 FAS-L Caspase-3
