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加味补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的ApoE-/-小鼠Toll样受体4及其下游主要元件的影响
目的:探究加味补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,讨论加味补阳还五汤对于动脉粥样硬化的防治机制.方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组,加味补阳还五汤组,每组10只,以10只C57BL/6J小鼠设空白组.除空白组正常饮食饮水外,每组给予高脂饲料喂养8周.空白组及模型组每日给与0.9％ NaC1溶液灌胃,阿托伐他汀组及加为补阳还五汤组每日以相应药物灌胃.第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C).采用苏木素-伊红(HE)染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比.以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4及MyD88,TRAF-6,NF-κB的mRNA表达;蛋白质印迹(Western blot)法测定其蛋白表达的变化.结果:血脂水平方面,与模型组比较加味补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TC,TG,HDL-C,LDL-C水平,同时升高HDL-C水平(P＜0.01);镜下观察加昧补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能较模型组斑块有所减少,主动脉血管细胞排列较整齐,炎性细胞浸润减轻,小鼠的主动脉斑块在血管的占比均有不同程度地降低(P＜0.01).mRNA与蛋白水平上与模型组比较加味补阳还五汤与阿托伐他汀组均能有效降低TLR4及MyD88,TRAF-6,NF-κB mRNA与蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:加味补阳还五汤对于AS的发生发展有预防作用,其机制可能与抑制TLR4及其下游信号转导通路主要元件有关.
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电针对高血压病前期大鼠Toll样受体4信号通路的影响
目的:通过电针高血压病前期大鼠足三里、曲池穴,观察其脾脏中Toll样受体4(TLR4)信号通路中TLR4、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、转录激活因子蛋白-1(AP-1)基因的表达情况.方法:10只盐抵抗大鼠为正常组;30只Dahl盐敏感大鼠分为模型组、针刺组、非经非穴组.先采用高盐饲养,当血压升高至高血压病前期水平时,电针治疗并改为普通饲料饲养,当血压恢复正常时,停止针刺并取材,检测各基因表达情况.结果:电针刺激后,与模型组相比,针刺组TLR4、TRAF-6、AP-1的mRNA基因表达均显著降低(P＜0.05).结论:针刺可有效改善高血压病前期大鼠免疫功能紊乱.
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4及其下游髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6表达的影响
目的 研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高、中、低浓度(1.6、0.8、0.4 g/mL)组,每组5只.各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天.末次灌胃给药2 h后,心脏采血,离心后分离血清.体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激后,分剐加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR方法 和Western blotting法分别测定TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的表达.结果 用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较,P<0.01,P<0.05).结论 益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,抑制下游NF-κB以及各种相关基因表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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肿瘤坏死因子受体相关因子6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4在未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎发病中的机制
未足月胎膜早破是产科常见的妊娠期并发症.未足月胎膜早破与感染密切相关,严重影响母儿结局.肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在炎症通路里起着关键的枢纽作用,近研究发现丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(MST4)可以动态应答细菌感染,并调节TRAF6的活性,抑制过度炎症反应.笔者就TRAF6和MST4在炎症通路中的作用机制以及其可能在未足月胎膜早破合并组织学绒毛膜羊膜炎中的重要意义进行综述.
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破骨细胞分化中NFATc1/miR-125a作用通路的研究
目的 研究破骨细胞分化中miR-125a受转录因子NFATc1的调控模式及其作用机制,寻找骨代谢疾病新的治疗靶点.方法 单核细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子-κB配体的受体激活剂(RANKL)诱导CD14外周血单核细胞(PBMCs)向破骨细胞分化.生物信息学运算预测结合于miR-125a启动子区域的转录因子,过表达实验和抑制实验用于研究转录因子对miR-125a在破骨细胞分化中表达的影响,荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合,凝胶迁移电泳实验(EMSA)和染色质免疫沉淀实验(CHIP)验证转录因子与miR-125a启动子区域的结合.结果 凝胶迁移电泳和染色质免疫沉淀实验证明了NFATc1结合于miR-125a的启动子靶位点.过表达NFATc1抑制miR-125a的表达;抑制NFATc1的表达则升高miR-125a的表达.结论 miR-125a在作用于其靶基因——肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6的同时受到转录因子NFATc1的负反馈调控,发挥其在破骨细胞分化中的调控作用.表明通过调控NFATc1的表达来改变miR-125a的表达,可能成为骨代谢疾病新的治疗靶点.
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TRAF6、HIF-1α在胶质瘤中的表达及与微血管密度的相关性研究
目的 研究胶质瘤组织中TRAF6和HIF-1α的表达及微血管密度,并探讨TRAF6和HIF-1α以及二者与微血管密度的相关性.方法 收集2007至2016年牡丹江医学院附属红旗医院的胶质瘤标本30例,其中低级别(Ⅰ级和Ⅱ级)胶质瘤16例,高级别(Ⅲ级和Ⅳ级)胶质瘤14例.通过免疫组化方法检测低级别和高级别胶质瘤组织中TRAF6与HIF-1仅的表达及二者的相关性;通过CD34阳性染色判定微血管密度并分析TRAF6和HIF-1 α与微血管密度的相关性.结果 TRAF6与HIF-1 α在低级别和高级别胶质瘤中均表达,但在高级别胶质瘤中的表达较低级别胶质瘤明显且二者具有相关性;同时在高级别胶质瘤中,TRAF6与HIF-1 α的表达均与微血管密度具有显著的相关性.结论 在高级别胶质瘤中TRAF6与HIF-1α高表达且TRAF6、HIF-1α和微血管密度间两两具有相关性.
关键词： 胶质瘤 血管新生 缺氧诱导因子-1 肿瘤坏死因子受体相关因子-6 相关性 -
TRAF6在胃癌患者腹直肌中的表达及意义
目的：分别检测各期胃癌患者和腹腔良性疾病患者腹直肌中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的表达情况，分析其表达的差异性，并进一步探讨 TRAF6与胃癌患者营养状况及预后的关系。方法应用实时荧光定量 PCR 和 Western blotting 检测 TRAF6在64例各期胃癌患者和53例腹腔良性疾病患者腹直肌中的表达情况，并与患者临床数据相结合，探讨其表达的意义。结果与腹腔良性疾病患者相比（1．249±0．723），Ⅰ期（2．080±0．611）、Ⅱ期（2．126±0．640）、Ⅲ期（3．127±0．953）、Ⅳ期（3．289±0．734）胃癌患者腹直肌中 TRAF6 mRNA 的表达显著升高，差异有统计学意义（t ＝4．107，P ＝0．001；t ＝4．128，P ＝0．000；t ＝8．741，P ＝0．000；t ＝9．208，P ＝0．000）。与腹腔良性疾病患者相比（0．088±0．013），Ⅰ期（0．198±0．042）、Ⅱ期（0．209±0．051）、Ⅲ期（0．295±0．072）、Ⅳ期（0．345±0．084）胃癌患者腹直肌中 TRAF6蛋白的表达显著升高，差异有统计学意义（t ＝5．203，P ＝0．000；t ＝5．642，P ＝0．000；t ＝9．351，P ＝0．000；t ＝9．854，P ＝0．000）。TRAF6 mRNA 在67．2％（43／64）的胃癌患者腹直肌组织中呈高表达。TRAF6 mRNA 的表达与胃癌患者体质量下降百分比（χ2＝12．231，P ＝0．000）、白蛋白水平（χ2＝22．808，P ＝0．000）显著相关。TRAF6 mRNA 在胃癌患者腹直肌中的表达与生存率显著相关（χ2＝3．933，P ＝0．047）。结论TRAF6在胃癌患者腹直肌中呈高表达，可能在胃癌患者恶病质的发生、发展过程中发挥关键性作用，其高表达提示预后不良。
关键词： 胃肿瘤 腹直肌 恶病质 肿瘤坏死因子受体相关因子-6 -
炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆中肿瘤坏死因子受体相关因子-6的激活
目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,TRAF-6)在炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆的表达,及其与内镜下疾病活动性的相关性.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF-6蛋白的表达,SYBR-green real time PCR方法分析炎症性肠病患者和正常对照者外周血单个核细胞中TRAF-6 mRNA的表达.数据处理使用Graph Pad Prism 5.结果 克罗恩病患者(P=0.000)和溃疡性结肠炎患者(P=0.000)血浆TRAF-6水平显著高于正常对照者,但是克罗恩病患者(r=-0.114,P=0.377)以及溃疡性结肠炎患者(r=0.044,P=0.727)血浆TRAF-6表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性.克罗恩病患者(P=0.000)和溃疡性结肠炎(P=0.000)患者外周血单个核细胞TRAF-6 mRNA表达均显著高于正常对照者外周血单个核细胞中mRNA的表达.结论 炎症性肠病患者血浆和外周血单个核细胞中均存在TRAF-6的激活,但血浆TRAF-6的高表达不能反映内镜下的疾病活动程度.
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护心康系列研究(四)护心康对内皮细胞髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子-6基因的影响
目的:研究护心康对MyD88和TRAF6的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制.方法:采用雄性中国本兔14只,随机分为正常组和护心康组,分别以蒸馏水和护心康连续灌胃7d,末次灌胃给药2h后心脏采血分离血清.体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为3组:正常组,模型组,护心康组.用LPS刺激2h后,模型组给予空白血清,护心康组给予含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR和Western blot分别测定MyD88和TRAF6mRNA的表达.结果:LPS刺激引起MyD88和TRAF6基因表达升高(P＜0.01);护心康组表达较模型组低(P＜0.05).结论:护心康具有降低内皮细胞MyD88和TRAF6基因表达的作用,其抗动脉粥样硬化的作用可能与此有关.
关键词： 护心康 内皮细胞 髓样分化因子88 肿瘤坏死因子受体相关因子-6
