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补阳还五汤含药血清对Toll样受体4信号转导通路及氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响
目的:从补阳还五汤含药血清对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)信号转导通路及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响,研究补阳还五汤防治动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)的机制.方法:含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为正常组、补阳还五汤高、中、低浓度组,每组5只.中药组分别以13.2,6.6,3.3 g·kg-1补阳还五汤ig,正常组以同等量的生理盐水ig,连续ig7 d.在末次ig给药2h后,心脏采血,离心后分离血清,获得3种不同浓度药物血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)(1 mg·L-1)刺激后,分别加入含10％高、中、低浓度补阳还五汤药物血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的基因表达,用Western blotting法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,LOX-1的蛋白表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用补阳还五汤含药血清干预后显著抑制TLR4,MyD88,TRAF-6,NF-κB及LOX-1的高表达(与模型组比较P＜0.05),而对TRAM和TRIF与模型组比较无明显抑制作用.结论:补阳还五汤可抑制TLR4和MYD88依赖性信号转导通路及LOX-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响
目的 观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇( estradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制.方法 将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组.各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清.从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8 g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达.结果 与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P ＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P＜0.01,P＜0.05).结论 温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一.
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4及其下游髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6表达的影响
目的 研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高、中、低浓度(1.6、0.8、0.4 g/mL)组,每组5只.各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天.末次灌胃给药2 h后,心脏采血,离心后分离血清.体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激后,分剐加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR方法 和Western blotting法分别测定TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的表达.结果 用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较,P<0.01,P<0.05).结论 益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,抑制下游NF-κB以及各种相关基因表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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益气活血复方对Toll样受体4信号转导通路及下游炎症因子的影响
目的 研究益气活血复方含药血清对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号转导通路及下游炎症因子血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1( LOX-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响,从基因和蛋白水平研究益气活血复方防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制.方法 含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即空白对照组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.正常组以生理盐水灌胃；中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组分别以高、中、低浓度益气活血复方灌胃,连续灌胃7天.在末次灌胃给药2h后,心脏取血,离心后分离血清.体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激2h后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预,24h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、骨髓样分化因子88( MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化因子(TRIF)、核转录因子-κB (NF-κB)、LOX-1、NF-α及ICAM-1的基因表达,用Western blot法分别测定TLR4、MyD88、TRAF-6、LOX-1的蛋白表达.结果 用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF、NF-κB、LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；对TRAM和TRIF无抑制作用.结论 益气活血复方可抑制TLR4信号转导通路及LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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中药对临床耐药菌株的体外抑菌试验观察
目的了解甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性肠杆菌科细菌,对中药制剂"肺炎1号"的敏感性,为耐药菌株的治疗寻找新的途径. 方法采用血清药理学检测方法,用不同浓度中药含药进行耐药菌株的抑菌试验. 结果通过"肺炎1号"含药血清对临床分离的MRSA菌株、产ESBLs肺炎克雷伯菌的抑菌试验表明:低血清抑菌滴度与阴性对照组比较差异有非常显著性(P<0.01);与阳性对照组比较,对MRSA菌株差异无显著性(P>0.05),而对产ESBLs肺炎克雷伯菌差异亦有显著性(P<0.05),抑菌效果优于阳性组. 结论采用本院自制中药复方制剂"肺炎1号"含药血清对临床分离的MRSA菌株和产ESBLs的肺炎克雷伯菌株进行抑菌试验,表现出较明显的抑菌作用,为拓宽中药制剂的用药范围,减轻耐药菌株的药物压力奠定了一定基础.
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薄层色谱技术在桉叶油含药血清制备中的应用
目的 探讨薄层色谱技术是否可用于指导桉叶油含药血清的制备.方法 薄层色谱技术检测不同稀释倍数的桉叶油样品.桉叶油灌胃小鼠,收集不同桉叶油剂量、不同灌胃方式及不同采血时间的血清样品,薄层色谱技术检测上述样品,并用气相色谱技术对上述结果 进行验证.结果 薄层色谱技术可以检测出不同稀释倍数的桉叶油样品的浓度差别.薄层色谱技术可以定性及半定量的检测血清中的桉叶油成分.高、中、低剂量的桉叶油灌胃SD大鼠收集的血清对MCF-7细胞生长的影响有差异(P<0.05).结论 薄层色谱技术可以指导桉叶油含药血清的制备.
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有关兔视网膜色素上皮细胞体外培养技术及中药含药血清制备方法的探讨
细胞生物学是一切生命科学的重要基础学科.近年来,细胞生物学发展迅速,其研究成果被广泛地应用于生命科学的各个领域,成为现代生命科学的核心学科之一,本文就与细胞生物学密切相关的细胞培养技术(兔视网膜色素上皮细胞体外培养)及血清药理学技术(中药含药血清制备)在关键步骤上做了较细致的探讨.
关键词： 兔视网膜色素上皮细胞 体外培养 中药含药血清 制备 -
血府逐瘀汤对Toll样受体4及下游信号转导通路主要元件的影响
目的:研究血府逐瘀汤含药血清对脂多糖诱导的血管内皮细胞Toll样受体4及下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件的影响,探讨血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化的机制.方法:采用药物血清学方法,用新西兰大耳白兔制备含药血清以备细胞实验使用.将血管内皮细胞随机分为空白对照组、模型组、西药对照组、血府逐瘀汤组,用脂多糖刺激2h后,分别加入西药对照药和含10％血府逐瘀汤含药血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6及NF-κB的基因表达,用Western blot方法测定TLR4和NF-κB蛋白表达.结果:用脂多糖刺激内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6及NF-κB的表达升高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而用血府逐瘀汤含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88、TRAF-6及NF-κB的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:血府逐瘀汤可抑制Toll样受体4及下游信号转导通路主要元件的表达,这可能是其防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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血府逐瘀汤对血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1等炎症因子表达的影响
目的:研究血府逐瘀汤含药血清对血管内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子--α(TNF-α)、血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨血府逐瘀汤防治动脉粥样硬化的机制.方法:血管内皮细胞随机分为对照组、模型组、西药对照组和血府逐瘀汤组,用LPS刺激2h后分别加入阿托伐他汀和血府逐瘀汤含药血清干预,24h后收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blot方法测定LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的基因及蛋白表达.结果:用LPS刺激内皮细胞后,引起LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达升高,差异有统计学意义(与对照组比较P＜0.01),而用血府逐瘀汤含药血清干预以后显著抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达,差异有统计学意义(与模型组比较P ＜0.05).结论:血府逐瘀汤可抑制LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达,这可能是其防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4/NF-KB信号通路及TNF-a ICAM-1 mRNA表达的影响
目的:研究益气活血复方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/NF-KB及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、细胞间黏附分子(ICAM-1)mRNA表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(As)的机制.方法:(1)选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清.(2)体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLK4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1mRNA的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的高表达(与模型组比较P＜0.01或P＜0.05).结论:益气活血复方可阻断TLK4/NF-KB信号通路的高表达,同时抑制TNF-a及ICAM-1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.
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补肾方和柔肝方含药血清对软骨细胞增殖动力学研究
目的:探讨补肾方和柔肝方对软骨细胞增殖的影响.方法:补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞,测定H3-TdR的掺入量CPM和MTT法测定OD值.结果:通过MTT法观察确定补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞观察点在第5～7天;采血时间点确定为末次灌胃后3h,而血清浓度确定为5%为宜;采血时间点确定为1d～3h,采血灌胃剂量确定为等效剂量;通过H3-TdR掺入,补肾方兔血清和柔肝方兔血清有明显促进DNA的合成作用.结论:补肾方和柔肝方有促进软骨细胞增殖的作用.
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中药含药血清对体外培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞影响的实验研究
目的:归纳总结中药含药血清对体外培养成纤维样滑膜细胞的影响的实验研究进展,为相关研究提供参考.方法:通过分析中药合药血清对体外培养成纤维样滑膜细胞影响的相关文献,探讨治疗类风湿关节炎的机理.结果:以含药血清代替中药粗提物进行实验,能较准确的反映药物在体内的生物转化过程及其作用结果.结论:运用血清药理学方法及体外培养细胞的方法进行类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的实验研究方便快捷.
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自制中药制剂对耐青霉素肺炎链球菌的抑菌效果观察
目的:观察耐青霉素肺炎链球菌(PRP)对自制中药制剂"肺炎1号"、"热必宁"、"清胆糖浆"的敏感性,针对耐药菌株寻找新的治疗途径.方法:采用血清药理学检测方法,用不同浓度中药含药血清进行耐药菌株的抑菌试验,并通过透射电镜观察证实.结果:上述中药低血清抑菌滴度与阴性对照组比较均有极显著差异(P<0.01);与阳性对照组比较,"热必宁"无显著差异(P>0.05),而"肺炎1号"、"清胆糖浆"均有显著差异(P<0.01),同时电镜微细结构观察亦可证实中药制剂破坏了细菌细胞壁结构.结论:三种中药制剂对PRP菌株均有明显抑制作用,为拓宽中药制剂的用药范围、寻找治疗耐药菌株的新途径奠定了基础.
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及LOX-1表达的影响
目的 研究益气活血复方含药血清对脂多糖( Lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(Toll - like receptor 4,TLR4)及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin -like oxidized low - density lipoprotein receptor -1,LOX -1)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方防治动脉粥样硬化( Atherosclerosis,AS)的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清；体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blotting法分别测定TLR4和LOX -1 mRNA和蛋白的表达.结果 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4和LOX -1 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4及LOX -1 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较P＜0.01).结论 益气活血复方可阻断TLR4及LOX -1高表达,有抑制TLR4和LOX -1的作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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中药含药血清对体外成骨细胞增殖和分化影响的实验研究进展
近年来不少学者从细胞分子生物学角度开展了中医药对成骨细胞(OB)影响的实验研究,为中医药防治骨质疏松提供了分子生物学理论依据,其中运用体外成骨细胞培养和中药血清干预实验,研究骨质疏松的中药防治是常用的方法之一,也是中药防治骨质疏松症研究热点之一,本文主要回顾了含药血清对成骨细胞的增殖与分化方面的相关文献,这些研究对中药防治骨质疏松症奠定了基础.
