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色氨酸合成酶文献资料
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结核分枝杆菌H37Rv色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析
目的 克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析.方法 以结核分枝杆菌(简称结核杆菌)H37Rv基因组为模板,扩增trpA基因,构建pET30a-trpA重组质粒;转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基(His-rMtTrpA).十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱分析测定相对分子质量(Mr)后,用圆二色光谱(CD)分析和同源模建方法检测二级和三级结构.研究不同浓度His-rMtTrpA对β亚基酶活反应的影响.结果 成功克隆了813 bp的目的 基因trpA,并获得了高纯度的His-rMtTrpA蛋白.重组蛋白Mr为33.151×103(含载体蛋白).25℃时His-rMtTrpA的二级结构包括31.8%α螺旋、31.8%β折叠、8.4%β转角和27.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)8桶状结构.酶学性质研究表明,在His-rMtTrpA与MtTrpB的摩尔比为2.2时,色氨酸合成酶α亚基可以大限度促进β亚基酶活反应.结论 成功得到高纯度的重组目的 蛋白His-rMtTrpA,其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础.
