首页 > 文献资料
-
WtCosmc质粒转染对Tn+肿瘤细胞恶性行为的影响
目的:以Tn+肿瘤细胞为靶标,研究野生型Cosmc(WtCosmc)质粒转染对其恶性行为的影响,以期为肿瘤的诊断及治疗提供新思路.方法:流式细胞术检测肿瘤细胞表面Tn抗原阳性率,免疫磁珠分选Tn+与Tn-肿瘤细胞;分选后的Tn+肿瘤细胞经Fugene 6转染WtCosmc质粒,并用免疫荧光检测细胞表面Tn抗原表达状况.分别采用荧光法、CCK-8和Transwell检测转染前后Tn+肿瘤细胞的T-synthase活性、细胞增殖、迁移能力及对Apo2L/TRAIL的敏感性.结果:与Tn-细胞相比,Tn+肿瘤细胞T-synthase活性及对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性较低;细胞增殖、迁移能力较强.经WtCosmc质粒转染后,Tn+细胞T-synthase活性及其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性明显增高;Tn抗原表达受抑;细胞增殖及迁移能力明显下降.结论:转染WtCosmc可恢复Tn+细胞T-synthse活性,抑制Tn抗原的表达,进而增强其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性,降低细胞增殖、迁移能力,有效抑制Tn+肿瘤细胞的恶性行为.
关键词： WtCosmc Tn抗原 细胞增殖 细胞凋亡 Apo2L/TRAIL -
人可溶性APO2L/TRAIL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的利用基因工程技术原核表达人可溶性APO2L并复性纯化成具生物活性形式。方法用PCR方法扩增APO2LcDNA(密码子114～281)并克隆至表达载体，重组体转化大肠杆菌JF1125摇瓶发酵，筛选高表达克隆于发酵罐经温度诱导表达。经盐酸胍溶解，空气氧化法稀释复性，超滤，Q-SepharoseFF阴离子交换柱层析等方法纯化人可溶性APO2L。利用流式细胞术检测产物对细胞的诱导凋亡活性。结果表达产物约占菌体总蛋白质的20%并在菌体内形成了包涵体，SDS-PAGE鉴定表达产物相对分子质量约21000。经上述纯化蛋白质纯度达90%以上，蛋白质可溶性好。观察到人可溶性APO2L诱导人宫颈癌HeLa细胞发生明显的凋亡。结论原核表达产物与真核表达产物一样具明显的诱导肿瘤细胞凋亡活性。
关键词： Apo2L/TRAIL 克隆 复性 大肠杆菌 凋亡
