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PEI介导的凋亡DNA胞内递送及其对原代巨噬细胞活化的作用
观察以多聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体,介导活化并发生凋亡的淋巴细胞来源的DNA(凋亡DNA)的胞内递送,探讨凋亡DNA对原代巨噬细胞活化的影响.采用PEI为载体,介导凋亡DNA和正常淋巴细胞来源的DNA(正常DNA)进入胞内,以ELlSA方法检测巨噬细胞IL-6、TNF-α的分泌;分析各种因素对PEI胞内递送效率的影响,并评价其对原代巨噬细胞的安全使用剂量.结果显示:PEI可介导DNA对原代巨噬细胞的胞内递送;凋亡DNA进入胞内后,可以刺激巨噬细胞活化,诱导炎症因子IL-6和TNF-α的分泌;相同的条件下,正常DNA却不能引起这些变化.进一步观察发现PEI与DNA的质量比为2或3时胞内递送效率佳;小于10 μg/ml的PEI用量并于转染6 h后换液对原代巨噬细胞毒性较小.上述结果表明,PEI作为载体,可以有效介导对原代巨噬细胞的基因(哺乳动物DNA或质粒)递送;进入胞内的凋亡DNA可促进巨噬细胞活化并分泌大量炎性细胞因子,这对于研究系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制具有意义.
关键词： 多聚乙烯亚胺(PEI) 凋亡DNA 巨噬细胞 SLE -
凋亡DNA对巨噬细胞的活化作用及其意义
为研究活化诱导的凋亡淋巴细胞来源的DNA(凋亡DNA)对小鼠巨噬细胞的体外活化作用,用ConA活化小鼠脾脏淋巴细胞并诱导其凋亡,将AnnexinV+凋亡细胞来源的DNA定义为凋亡DNA,而正常淋巴细胞来源的DNA定义为正常DNA,分别与小鼠巨噬细胞株RAW264.7体外孵育48 h,然后用碘化丙啶(PI)染色方法观察细胞吞噬的DNA平均荧光强度(MEI),流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测Ⅱ型干扰素(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌情况.结果显示:凋亡DNA和正常DNA都能被RAW264.7有效地吞噬;然而,凋亡DNA较正常DNA能显著上调RAW264.7细胞表面MHC Ⅱ类分子以及协同刺激分子CD40、CD80、CD86的表达, 同时能够诱导细胞分泌高水平的IFN-γ、IL-12和TNF-α.表明正常DNA对巨噬细胞无活化作用,而凋亡DNA对巨噬细胞有很强的活化作用,可上调巨噬细胞的APC功能并促使其分泌多种细胞因子.提示凋亡的自身DNA作为免疫原,可有效活化巨噬细胞.
