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兔抗人DR5抗血清诱导Jurkat细胞凋亡
制备兔抗人sDR5抗血清,检测它对Jurkat细胞的生长抑制和凋亡诱导作用.采用本室制备的sDR5免疫新西兰白兔,制备兔抗人sDR5抗血清,用ELISA法测定抗sDR5抗血清效价及抗血清的特异性.MTT试验分析它对Jurkat细胞生长抑制影响,倒置光显微镜和荧光显微镜观察抗sDR5抗血清对Jurkat细胞形态的影响,用Annexin V/PI双染试剂盒检测Jurkat细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中DNA的片断化.结果:获得了高效价特异性兔抗人sDR5抗血清.兔抗人sDR5抗血清对Jurkat细胞具有显著的细胞生长抑制作用,并呈剂量依赖性.兔抗人sDR5抗血清处理后,Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体等.流式细胞术结果显示:兔抗人sDR5血清1/80、1/160作用Jurkat细胞2 h,细胞凋亡率分别为54.98%和34.13%.兔抗人sDR5抗血清可导致Jurkat细胞中的DNA片段化.本室制备的兔抗人sDR5抗血清能抑制Jurkat细胞生长和诱导Jurkat细胞凋亡.
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检测DR5双抗体夹心 ELISA方法的建立及应用
目的:建立检测DR5双抗体夹心 ELISA方法,通过检测慢性乙型肝炎患者血清可溶性DR5水平,探讨其在肝炎发病机理中的作用.方法:采用本室制备的鼠抗DR5的单抗YM366ED作为包被抗体, 鼠抗DR5的单抗YM366EC标记HRP,建立检测sDR5的ELISA,并测定52例慢性乙型肝炎和30例正常人血清sDR5浓度.结果:建立了检测人sDR5的夹心ELISA法,方法的变异系数小于5%,回收率85%以上.慢性乙型肝炎患者血清sDR5浓度明显高于正常对照组.结论:成功地建立了一种可用于检测血清sDR5的双抗体夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具.血中sDR5在慢性乙型肝炎发病过程中可能起着重要作用,检测病人血中sDR5水平可作为慢性乙型肝炎疾病活动性指标.
