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近交系海南五指山猪SLA经典Ⅰ类和Ⅱ类分子序列分析
为筛选适合我国异种移植研究的猪种提供参考依据,采集近交系海南五指山猪种全血标本6例, 利用 RT-PCR扩增得到cDNA产物,纯化、克隆、测序得到SLA经典Ⅰ类P1、P14座位和Ⅱ类DQA、DQB、DRA、DRB座位基因序列共6个.与Genbank中相关序列进行比较分析发现:所得序列是SLA Ⅰ类和Ⅱ类基因的新等位基因.在中国非协调性猪-人异种移植中,海南五指山猪种在与人类MHC遗传基因水平相似性方面有一定优势,可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造.
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3个猪链球菌2型四川分离株4个毒力因子基因序列测定与分析
目的 设计了特异性引物对3个致病性猪链球菌2型(Ss2)四川分离株4个主要毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2分别进行了扩增, 序列测定与分析结果表明3个Ss2四川分离株均存在4个毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2,其核苷酸序列与1998年江苏分离株9801及国外参考菌株的同源性均大于99.5%,提示3个四川分离菌株与1998年江苏流行的高毒力菌株可能具有共同的来源.
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肺癌EB病毒LMP1基因片段的检测及变异株的意义初探
目的:研究EB病毒LMP1基因与肺癌的关系,并对其变异株进行分析.方法:应用多聚酶链反应检测了40例肺癌EBV-LMP1基因片段,并对其进行克隆及测序分析.结果:40例肺癌标本中,11例(27.5%)阳性;对11例EBV-LMP1 DNA阳性产物用限制性内切酶StyⅠ酶切消化,发现9例与标准病毒完全一致,2例不同,提示EBV-LMP1基因有变异存在.结论:EB病毒的感染及LMP1基因片段的变异在肺癌的发生、发展中可能发挥着一定的作用.
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核苷酸序列测定法定量评价病毒相对适合度
目的:评价核苷酸序列测定法定量检测病毒相对适合度的可靠性.方法:用RT-PCR法扩增此前筛选获得的Palivizumab逃逸株F基因片断(分别于F基因第816位和828位带有区别于原型株的遗传标志).RT-PCR产物经纯化、定量并调节至相同浓度,按不同比例混合后进行核苷酸序列测定.用ABI公司EDIT软件分析序列双峰部位不同RT-PCR产物所占比例,代表病毒适合度水平,用分子克隆法定量验证序列分析定量评估病毒相对适合度的可靠性.结果:按不同比例预混得RSV A2原型株和Palifizumab逃逸株(MP4和F212)分别在F基因第816位和828位出现双峰.峰高测定所获RT-PCR产物比例与预混比例十分接近.采用分子克隆法获得的RT-PCR产物比例亦与序列测定定量分析结果基本一致.结论:序列测定定量分析法评估病毒相对适合度(Relative fitness)结果稳定可靠,简便易行,适用于临床检测HIV等病毒感染性疾病耐药毒株是否出现及其适合度变化.
